Oleorresina de Copaifera officinalis frente a Enterococcus faecalis : atividade antimicrobiana, sinergismo e análise de biofilmes em cepas sensíveis e resistentes à vancomicina

Abstract

A crescente disseminação da resistência antimicrobiana tem comprometido significativamente a eficácia terapêutica no tratamento de infecções bacterianas, incluindo as associadas a enterococos resistentes à vancomicina. Diante desse cenário, a prospecção de produtos naturais como fontes de novos agentes antimicrobianos torna-se uma estratégia promissora. Assim, o presente estudo avaliou a atividade da oleorresina de Copaifera officinalis (copaíba) frente a cepas clínicas de Enterococcus faecalis sensíveis (VSE) e resistentes à vancomicina (VRE), bem como sua capacidade de modular a ação de antibióticos convencionais e interferir na formação de biofilmes. A atividade antibacteriana foi avaliada pelo método de difusão em disco frente a bactérias Gram-positivas, incluindo Enterococcus faecalis ATCC 29212, Staphylococcus aureus ATCC 29231, Bacillus cereus ATCC 14579, Listeria monocytogenes ATCC 7644, bem como frente a bactérias Gram-negativas, incluindo Salmonella spp., Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 e Escherichia coli INCQS 0031. A determinação da concentração inibitória mínima (CIM) da oleorresina de copaíba por microdiluição em caldo, a avaliação do efeito bactericida por subcultivo, as interações entre a oleorresina e antibióticos convencionais por dupla difusão em disco e a inibição da formação de biofilmes por microscopia confocal de varredura a laser foram realizados em cepas sensíveis e resistentes à vancomicina (VSE e VRE). A análise de biofilmes incluiu coloração com fluoresceína diacetato (FDA) e iodeto de propídio (IP), sendo a viabilidade celular estimada pela razão IP/FDA. Os resultados do presente estudo demonstraram que a oleorresina de copaíba apresentou atividade frente a bactérias Gram-positivas, não sendo observada atividade contra bactérias Gram-negativas. A CIM foi de 1,25% (v/v) e 2,5% (v/v) para as cepas VSE e VRE, respectivamente. O subcultivo indicou efeito bacteriostático. A dupla difusão em disco demonstrou predominância de antagonismo entre a oleorresina e os antibióticos avaliados para VSE e VRE. A análise por microscopia confocal evidenciou atividade dose-dependente da oleorresina em biofilmes de E. faecalis, com maior efeito em isolados VSE. Conclui-se que a oleorresina de C. officinalis apresenta atividade antimicrobiana e antibiofilme frente a E. faecalis, inclusive VRE, embora com menor intensidade nos isolados resistentes.

The increasing spread of antimicrobial resistance has significantly compromised the therapeutic efficacy of treatments for bacterial infections, including those associated with vancomycin-resistant enterococci. Due to this situation, the exploration of natural products as sources of new antimicrobial agents has emerged as a promising strategy. Accordingly, the present study evaluated the activity of the oleoresin from Copaifera officinalis (copaiba) against clinical strains of vancomycin-susceptible (VSE) and vancomycin-resistant (VRE) Enterococcus faecalis, as well as its ability to modulate the activity of conventional antibiotics and interfere with biofilm formation. Antibacterial activity was assessed using the disk diffusion method against Gram-positive bacteria, including Enterococcus faecalis ATCC 29212, Staphylococcus aureus ATCC 29231, Bacillus cereus ATCC 14579, and Listeria monocytogenes ATCC 7644, as well as Gram-negative bacteria, including Salmonella spp., Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, and Escherichia coli INCQS 0031. The minimum inhibitory concentration (MIC) of copaiba oleoresin was determined by broth microdilution, bactericidal activity was evaluated by subculture assays, interactions between the oleoresin and conventional antibiotics were investigated using the double disk diffusion method, and biofilm inhibition was analyzed by confocal laser scanning microscopy in vancomycin-susceptible and vancomycin-resistant strains. Biofilm analysis included staining with fluorescein diacetate (FDA) and propidium iodide (PI), and cell viability was estimated based on the PI/FDA ratio. The results demonstrated that copaiba oleoresin exhibited antibacterial activity against Gram-positive bacteria, whereas no activity was observed against Gram-negative bacteria. MIC values were 1.25% (v/v) and 2.5% (v/v) for the VSE and VRE strains, respectively. Subculture assays indicated a bacteriostatic effect. Double disk diffusion assays revealed a predominance of antagonistic interactions between the oleoresin and the antibiotics tested against both VSE and VRE strains. Confocal microscopy analysis showed a dose-dependent effect of the oleoresin on E. faecalis biofilms, with greater activity observed in VSE isolates. In conclusion, C. officinalis oleoresin exhibits antimicrobial and antibiofilm activity against E. faecalis, including VRE strains, although its effects are less pronounced in resistant isolates.