Triagem neonatal para atrofia muscular espinhal através de PCR em tempo real : um estudo piloto no Brasil

Abstract

A atrofia muscular espinhal (AME) é caracterizada pela degeneração dos neurônios motores da medula espinhal, causando fraqueza progressiva dos membros e tronco, seguida de atrofia muscular. A condição é considerada uma das doenças de herança autossômica recessiva mais frequentes, com uma incidência mundial estimada de 1 em cada 10.000 nascidos vivos. Alterações no gene SMN1 causam a doença, sendo que em 95% dos pacientes com AME encontra- se a ausência do exon 7 do gene SMN1 em homozigose, devido a deleção deste gene ou conversão para o gene SMN2, altamente homólogo ao gene SMN1. Devido a um espectro uniforme de mutação, a análise mais comumente realizada é a detecção de deleção e conversão gênica dos exons 7 e/ou 8 dos genes SMN1 e SMN2. A AME é uma doença de início infantil e apresenta incidência estimada alta, com isso, a realização de testes de triagem neonatal para detecção de afetados é importante e necessária, uma vez que que existem tratamentos disponíveis para a doença, os quais são mais eficazes quando implementados precocemente. No Brasil, o Programa Nacional de Triagem Neonatal (PNTN) realiza o teste do pezinho para 6 doenças, coletando e processando amostras de gotas de sangue do calcanhar do recém-nascido, impregnadas em papel filtro. Em maio de 2021, a Lei no 14.154 foi aprovada para o aperfeiçoamento do PNTN. A proposta desta lei consiste na ampliação das doenças a serem rastreadas pelo teste do pezinho, incorporando aproximadamente mais 50 doenças, de maneira escalonada. A inclusão da AME está prevista para a quinta etapa da ampliação. O presente estudo teve como objetivo desenvolver um projeto piloto de triagem neonatal para AME no Brasil, através da análise de recém-nascidos do Estado do Rio Grande do Sul, no período de um ano, utilizando a técnica de PCR quantitativo em tempo real (SALSA® MC002 SMA Newborn Screen). As amostras utilizadas foram coletadas nas Unidades Básicas de Saúde pertencentes ao Serviço de Referência em Triagem Neonatal do Rio Grande do Sul (SRTN/RS) e enviadas ao Hospital Materno Infantil Presidente Vargas para realização do teste do pezinho convencional. Posteriormente, foram encaminhadas ao Laboratório de Genética Molecular do Hospital de Clínicas de Porto Alegre. Ao final de 8 meses do estudo, aproximadamente 25.000 amostras foram processadas e analisadas, possibilitando a identificação de 3 amostras positivas para AME. Estas amostras identificadas como positivas na triagem inicial obtiveram confirmação do resultado por amplificação multiplex de sondas dependente de ligação (MLPA), considerado teste padrão ouro para o diagnóstico. Logo, pode-se concluir que este trabalho demonstrou sua efetividade com a validação da técnica SALSA® MC002 SMA Newborn Screen para triagem neonatal de AME no Estado do Rio Grande do Sul utilizando amostras provenientes do teste do pezinho, sendo uma técnica adequada para inclusão na rotina laboratorial. Ademais, foram obtidos dados populacionais sobre a incidência estimada de AME no Rio Grande do Sul, com base na frequência de casos positivos. Estes dados podem servir como base para o planejamento de estudos mais amplos e para a implantação definitiva da triagem neonatal para AME no estado do Rio Grande do Sul e no Brasil.

Spinal muscular atrophy (SMA) is characterized by degeneration of spinal cord motor neurons, causing progressive weakness of limbs and trunk, followed by muscle atrophy. The condition is considered one of the most common autosomal recessive disorders, with an estimated worldwide incidence of 1 in 10,000 live births. Alterations in the SMN1 gene cause the disease, and in 95% of patients with SMA, the exon 7 of the SMN1 gene is absent in homozygosis, due to the deletion of this gene or conversion to the SMN2 gene, that is highly homologous to the SMN1 gene. Due to a uniform spectrum of mutation, the most commonly performed analysis is the detection of deletion and gene conversion of exon 7 and/or 8 of the SMN1 and SMN2 genes. SMA is a childhood-onset disease and presents a high estimated incidence, therefore, performing newborn screening tests to detect affected individuals is important and necessary, since there are treatments available for the disease, which are more effective when implemented early. In Brazil, the National Newborn Screening Program (PNTN) performs the heel prick test for 6 diseases, collecting and processing samples of blood drops from the newborn's heel, impregnated in filter paper. In May 2021, Law No. 14,154 was approved to improve the PNTN. The proposal of this law consists of expanding the diseases to be screened by the heel prick test, incorporating approximately 50 more diseases, in a staggered manner. The inclusion of the SMA is planned for the fifth stage of the expansion. The present study aimed to develop a pilot project for newborn screening for SMA in Brazil, through the analysis of newborns in the State of Rio Grande do Sul, over a period of one year, using quantitative real-time PCR technique (SALSA® MC002 SMA Newborn Screen). The samples used were collected at the Basic Health Units belonging to the Reference Service in Newborn Screening of Rio Grande do Sul (SRTN/RS) and sent to the Hospital Materno Infantil Presidente Vargas to perform the conventional heel prick test. Subsequently, they were sent to the Molecular Genetics Laboratory of the Hospital de Clinicas de Porto Alegre, where they were processed and analyzed. At the end of 8 months of the study, approximately 25,000 samples were processed and analyzed, allowing the identification of 3 positive samples for SMA. Those samples identified as positive in the initial screening were confirmed by Multiplex Ligation-Dependent Probe Amplification, considered the gold standard test for diagnosis. Therefore, it can be concluded that this work demonstrated its effectiveness with the validation of the SALSA® MC002 SMA Newborn Screen technique for newborn screening of SMA in the State of Rio Grande do Sul using samples from the heel prick test, being an adequate technique for inclusion in the laboratory routine. Furthermore, population data were obtained on the estimated incidence of SMA in Rio Grande do Sul, based on the frequency of positive cases. These data can serve as a basis for planning broader studies and for the definitive implementation of newborn screening for SMA in the State of Rio Grande do Sul and in Brazil.