Atividade anti-candida e propriedades toxicológicas do extrato vegetal bruto de Tripodanthus acutifolius

Abstract

Compostos azólicos têm sido amplamente utilizados no controle de fungos patogênicos e fitopatogênicos, contribuindo para o surgimento de resistência e tornando a disponibilidade do arsenal antifúngico cada vez mais escasso. Além disso, a resistência adquirida por estes microrganismos requer doses cada vez mais elevadas destes agentes antifúngicos, o que pode implicar em maior toxicidade ao organismo hospedeiro. Assim, a prospecção de novas substâncias com propriedades antifúngicas e baixa toxicidade torna-se essencial. Em geral, as plantas constituem um arsenal valioso para a descoberta de novas substâncias, como Tripodanthus acutifolius (Loranthaceae), planta amplamente distribuída na América do Sul e extensivamente utilizada na medicina popular com reportada atividade antimicrobiana, antiinflamatória, analgésica, antipirética e diurética. Neste contexto, o presente estudo teve como objetivo avaliar a atividade antifúngica in vitro do extrato metanólico bruto (EMB) das folhas de T. acutifolius contra os isolados de Candida, bem como avaliar seu perfil toxicológico e fitoquímico. O EMB foi obtido por extração em Soxhlet e sua atividade antifúngica foi avaliada através da determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e a capacidade de interação com o fármaco fluconazol (FLC), através do ensaio de checkerboard, contra isolados de Candida albicans, C. glabrata, C. krusei, C. parapsilosis e C. tropicalis. O perfil toxicológico foi avaliado através da determinação da viabilidade celular sobre queratinócitos humanos, além da determinação do grau de irritação de mucosa e avaliação histopatológica de dano tecidual. Paralelamente aos testes farmacológicos, foi realizada Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) para identificar os metabólitos constituintes deste extrato vegetal. O EMB de T. acutifolius apresentou atividade antifúngica contra as diferentes espécies de Candida com valores de CIM mais baixos do que os apresentados pelo FLC. Ao comparar os valores de CIM apresentados somente pelo FLC com aqueles exibidos após a combinação entre FLC e o EMB, observou-se uma diminuição destes valores, onde p=0,02744 demonstrou diferença significativa entre os tratamentos, sugerindo uma contribuição do EMB para uma melhor eficiência da droga sintética. Quanto ao perfil toxicológico, o teste de viabilidade celular apresentou não citotoxicidade ou fraca citotoxicidade em concentração com atividade anti-Candida. Além disso, a avaliação do grau de irritação de mucosa e a avaliação histopatológica não indicaram irritação e lesões teciduais em todas as concentrações medidas. Através da avaliação do perfil fitoquímico por CLAE, foi possível identificar quatro compostos fenólicos no EMB: ácido gálico, catequina, quercetina e rutina, sugerindo a contribuição destes compostos para essas propriedades. Este estudo não apresenta precedentes e sugere que o EMB das folhas de T. acutifolius constitui fonte promissora para o desenvolvimento de agentes anti- Candida.

Azole compounds have been widely used to control pathogenic and phytopathogenic fungi, contributing for the rise in the fungi resistance and reducing the availability of the antifungal arsenal. In addition, the resistance acquired by these microorganisms require higher doses of these antifungal agents, which may imply in a greater toxicity refore, the prospection of a new substance with antifungal and low toxicity properties becomes essential. In general, plants are a valuable arsenal for the discovery of new substances, such as Tripodanthus acutifolius (Loranthaceae), which is widely distributed in South America and extensively used by folk medicine with reported antimicrobial, anti-inflammatory, analgesic, antipyretic and diuretic activities. In this context, the present study aimed to evaluate in vitro antifungal activity of crude methanolic extract of T. acutifolius leaves against Candida isolates, as well to evaluate the toxicological and phytochemical profile. The crude methanolic extract was obtained by extracting Soxhlet and its antifungal activity was evaluated by the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and the ability to interact with the drug fluconazole (FLC), through the checkerboard assay, against C. albicans, C. glabrata, C. krusei, C. parapsilosis and C. tropicalis strains. The toxicological profile was evaluated through the determination of cell viability on human keratinocytes, as well as through the determination of the degree of mucosal irritation and histopathological evaluation on tissue damage. In parallel of pharmacological tests, High-Performance Liquid Chromatography (HPLC) was performed to identify the metabolites constituent of this plant extract. The crude methanolic extract of T. acutifolius presented antifungal activity against the Candida species, with MIC values ranging from 16 to 64 g/mL, where four yeast isolates presented lower values than those presented by FLC. When comparing the MIC values, presented only by the FLC with those presented after the combination between FLC and the crude extract, a decrease of these values was observed, where p = 0.02744 showed a significant difference between the treatments, suggesting a contribution of the crude extract to a better efficiency of the synthetic drug. Regarding the toxicological profile, the cell viability assay presented no cytotoxicity or weak cytotoxicity at concentrations ranging from 1 to 64 g / mL, same ranges than those with anti-Candida activity. The assays for evaluation of the degree of mucosal irritation and the assay to evaluate tissues damage indicated no irritation and no tissue lesions in all measured concentrations. Through the evaluation of the phytochemical profile by HPLC, it was possible to identify four phenolic compounds in the crude methanolic extract: gallic acid, catechin, quercetin and rutin, suggesting their contribution for these properties. This study is unprecedented and suggests that the crude methanolic extract of the leaves of T. acutifolius is a promising source for the development of anti-Candida agents.