Fatores de regulação do transporte de aminoácidos e síntese proteica em testículos de ratos

Abstract

Foi já demonstrado que o FSH estimula o transporte de aminoácidos em testículos de ratos imaturos (65) . Além disso, foi descrito um efeito estimulatório do FSH sobre a síntese proteica (66). Por outro lado, ainda não foi determinado se estes efeitos (sobre a síntese proteica e transporte de aaminoácidos) refletem ações separadas do hormônio no testículo ou representam etapas de um mesmo efeito biológico. Com base nestas questões foram estudados os seguintes aspectos: a) se os efeitos do FSH sobre o transporte de aminoácidos e síntese proteica testicular poderiam ser dissociados através da redução na concentração de sódio extracelular; b) o papel do AMP cíclico como 2° mensageiro sobre estes parâmetros, utilizando o derivado dibutiril-AMPc; c) a influência da testosterona "in vivo" sobre os dois fenômenos; d) a ação da glicose "in vitro" sobre transporte de aminoácidos e síntese proteica em testículos normais e irradiados para verificar o efeito da hexose nestas duas preparações e e) o efeito da inibição total da síntese proteica pela cicloheximida sobre o transporte de aminoácidos em meio normo e hipossódico e a ação do FSH nestas condições experimentais. Foram utilizados ratos Wistar normais e c/testiculos enriqueeidos em células de Sertoli (SCE) , imaturos (13 e 19 dias de idade) e pré-púberes(30 a 37 dias de idade). Os testículos foram incubados em diferentes meios de incubação a 32° -34°C, com atmosfera de carbogênio (95% O2 e 59 CO2), no incubador metabólico Dubnoff. Avaliaram-se: a) o transporte do ác. α.aminoisobutirico (α-AIB-C14) e b) o transporte de uma mistura de aminoácidos -C14 e sua incorporação à proteína testicular, simultaneamente, sob diversas condições experimentais: diferentes concentrações de sódio no meio de incubação; administra­ção de FSH (15 μg/rato) IP, 1 h antes da realização do experimento ou testosterona depot (1 mg/rato) SC, 15 h antes do início do procedimento experimental; pré-incubação com o derivado dibutírico do AMPc - DBAMPc, na concentração de 1 mM durante 60 minutos; adição de glicose ao meio de incubação numa concentração de 14 mM e pré-incubação com cicloheximida na concentração de 100 ug/ml de tampão durante 60 minutos. O transporte dos aminoácidos foi expresso pela relação tecido/meio entre as cpm do meio intra e extra-celular e a síntese proteica foi a medida das cpm do "pellet" proteico precipitado por ác. tricloro-acético e dissolvido em ác. fórmico. Através dos resultados obtidos verificou-se que: 1. A redução na concentração de sódio no meio de incubação diminuiu os valores de transporte de aminoácidos e o estímulo do FSH sobre este fenômeno, mas não modificou a incorporação dos aminoácidos à proteína, nem o efeito estimulatório do FSH sobre a mesma, dissociando-se, assim, os efeitos da gonadotrofina sobre a síntese proteica e sobre o transporte de aminoacidos; 2. O DBAMPc, a testosterona e a glicose estimularam a síntese proteica mas não modificaram o transporte dos aminoácidos, exceto no grupo de ratos SCE imaturos onde o derivado dibutírico do AMPc exerceu um discreto efeito estimulatório sobre o transporte de aminoácidos. Além disso, a glicose aumentou os níveis de incorporação de aminoácidos à proteína testicular no grupo de animais irradiados pré-púberes, sugerindo um efeito direto também sobre as células de Sertoli; 3. Com o bloqueio da síntese proteica pela cicloheximida, elevaram-se os valores de acúmulo intra-celular de aminoãcidos com a normalização dos níveis de sódio extra-celular, mas não se observou nenhum estímulo do FSH sobre o transporte de aminoácidos nestas condições. Assim, no testículo, a síntese proteica e o transporte de aminoácidos respondem de forma independente e com características próprias a diferentes estímulos. Outrossim, o efeito do FSH sobre o transporte de aminoácidos parece requerer a presença de síntese proteica ativa.