Lipidômica do plasma seminal em equinos

Abstract

A infertilidade equina é um grande desafio que vem sido estudada a anos, tanto nas éguas quanto nos garanhões, a fim de aumentar os índices de prenhez e recuperação embrionária. Através dos estudos moleculares, como a lipidômica, aliados aos métodos convencionais de análise de sêmen é possível se obter novos dados a respeito da fertilidade equina. O objetivo deste projeto foi identificar as diferenças na lipidômica do plasma seminal de cavalos férteis e sub-férteis da raça Crioula. Foram utilizados 24 garanhões, cujo ejaculados foram coletados durante a estação reprodutiva e a fertilidade dos mesmos foi avaliada através do histórico reprodutivo. Os garanhões foram divididos em dois grupos: Férteis, quando a taxa de prenhez por ciclo foi ≥ 60% e Sub-férteis, com taxa de prenhez ≤ 40%. As taxas de prenhez variaram entre 20.2% e 95.6%, com diagnóstico no 16o dia após inseminação. Após análise espermática, todas as amostras foram submetidas a cromatografia líquida de alta performance acoplada a espectrometria de massa, seguida da identificação dos lipídeos, através do software Data Analysis 4.2. Para análise estatística, foi utilizada a correlação de Pearson, para os dados paramétricos o teste utilizado foi a Anova e para dados não paramétricos o teste utilizado foi o Mann Whitney. Um total de 10 moléculas lipídicas foram identificadas e validadas, sendo elas pertencentes a três diferentes classes: Glicerolipídeos, Glicerofosfolipídeos e Esfingolipídios, que quando avaliadas em grupos, somente a ceramida obteve diferença estatística significativa, contudo as outras moléculas obtiveram correlação com diversas variáveis da cinética espermática (P ≤0.05), como a fosfatidilcolina, diacilgicerol e esfingomielinas. A identificação de possíveis biomarcadores para a fertilidade equina é uma ferramenta que visa facilitar o diagnóstico e mediar intervenções a fim de melhorar o potencial de fertilização de garanhões inférteis.

Equine infertility is a huge challenge that has being studied for years, in mares and in stallions, to improve the number of pregnancy and embryo recovery. Molecular approaches, like lipidomic, associated to conventional semen assessment methods made possible to obtain new data about equine fertility. The objective of this project was to identify the difference between seminal plasma lipidomic from fertile and sub-fertile Criollo horses. Twenty four stallions were used whose semen were collected during the breeding season and fertility were evaluated based on reproductive history. Stallions were dived in two groups: Fertile (pregnancy rate per cycle ≥ 60%), and Subfertile (pregnancy rate of ≤ 40%). Pregnancy rates (diagnosed at day 16 after artificial insemination) ranged from 20.2% to 95.6%. After sperm analyzes, ultra-performance liquid chromatography coupled to a mass spectrometer was performed in all samples followed by lipid molecules identification, using Data Analysis 4.2 software (Bruker Daltonics, Germany). For statistical analysis, Pearson's correlation was used, for parametric data the test used was the Anova and for non-parametric data the test used was the Mann Whitney. A total of 10 lipid molecules were identified and validated, those being categorized as Glycerolipids, Glycerophospholipids and Sphingolipids, those when evaluated in groups, only ceramide had a significant statistical difference, but other molecules had significant correlation with one or more variables from sperm kinetics (P ≤0.05), like phosphatidilcoline, diacylglycerol and sphingomyelin . The identification of possible biomarkers related to equine fertility is a tool to facilitate diagnosis and interventions to improve stallion’s infertility.