Avaliação das proteínas do plasma epididimário e desenvolvimento testicular de equinos no período da peri-puberdade

Abstract

O presente estudo foi conduzido no intuito de avaliar o desenvolvimento reprodutivo de equinos machos no período da peri-puberdade. Vinte machos Crioulos foram castrados e avaliados quanto ao crescimento corporal e testicular, presença de espermatozoides epididimários, desenvolvimento de epitélio seminífero e proteoma da cauda do fluido epididimário, utilizando 2D-PAGE e espectrometria de massa. Os equinos foram agrupados em três categorias: Grupo I (n = 7) com idade entre 9 e 15 meses; Grupo II (n = 6) com mais de 15 meses e menos de 20 meses de idade e Grupo III (n = 7) com mais de 20 meses e até 30 meses de idade. O peso corporal médio dos animais aumentou significativamente em todas as faixas etárias, p <0.001, GI para GIII (264 ± 15 kg e 386 ± 17 kg; p <0.001) e GII para GIII (334 ± 24 kg e 386 ± 17 kg, p < 0.01). Não houve diferença entre o volume do testículo direito e esquerdo. As alterações do peso testicular relacionadas à idade mostraram a mesma tendência que o volume testicular total. Ambos aumentaram (p <0.001), do GI (23.6 ± 10.3 g e 38.9 ± 20.4 cm3) para o GIII (109.2 ± 33.3 g e 194.9 ± 59.0 cm3), e do GII para o GIII (53.3 ± 17.0 g e 91.7 ± 32.6 cm3; 109.2 ± 33.3 g e 194.9 ± 59.0 cm3, respectivamente), mas não houve diferença significativa (p > 0,05) entre GI e GII. Em média, 5.4% dos túbulos seminíferos não apresentaram células germinativas nos animais do GI, diminuindo para 1.7% no GII e 0% no GIII. O número de túbulos contendo espermátides maduras e espermatozóides aumentou com a idade. No presente estudo, todos os animais com 17.3 meses de idade ou mais atingiram a puberdade e os primeiros espermatozóides apareceram no GII. A análise de abundância dos spots protéicos do líquido da cauda epididimária foi estatisticamente semelhante entre o GI e o GII (66 ± 38 e 97 ± 34 spots; p > 0,05) e entre o GII e o GIII (97 ± 34 e 139 ± 50 spots; p > 0,05), mas aumentou do GI para GIII (66 ± 38 e 139 ± 50 spots, p < 0,001). Este estudo indica que a idade e o tamanho testícular estão relacionados. Com exceção de um animal, o início da puberdade começou a partir do GII, coincidindo com aparecimento dos primeiros espermatozóides no lúmen dos túbulos seminiferous e fluido epididimário, em potros de 15.2 meses de idade. As proteínas identificadas têm uma estreita relação com o desenvolvimento dos espermatozóides e sua capacidade de fertilização, o que contribui para a compreensão e confirmação do processo evolutivo das células germinativas no período da peri-puberdade.

The present study was conducted to evaluate the reproductive development of male horses in the period of peri-puberty. Twenty male Criollo horses were castrated and evaluated for body and testis growth, presence of epidydimal sperm, development of seminiferous epithelium and proteome of cauda epididymal fluid, using 2D–PAGE and mass spectrometry. Horses were grouped into three categories: Group I (n=7) aged from 9 to 15 months; Group II (n=6) over 15 months and less than 20 months and Group III (n=7) over 20 months and up to 30 months of age. The average body weight of the animals increased significantly within all age groups, (p< 0,001), GI to GIII (264 ± 15 kg and 386 ± 17 kg; p < 0,001) and GII to GIII (334 ± 24 kg and 386 ± 17 kg; p < 0,01). There was no difference between the testicular volume from the right and left testes. Age-related changes of testicular weight showed the same trend as the combined testicular volume. Both increased from GI (23.6 ± 10.3 g and 38.9 ± 20.4 cm3) to GIII (109.2 ± 33.3 g and 194.9 ± 59.0 cm3), and from GII to GIII (53.3 ± 17.0 g and 91.7 ± 32.6 cm3; 109.2 ± 33.3 g and 194.9 ± 59.0 cm3, respectively; p < 0.001), but there was no significant difference (p > 0.05) between GI and GII. On average, 5.4% of seminiferous tubules had no germ cells in animals from GI, decreasing to 1.7% in GII and 0% in GIII. The number of tubules containing mature spermatids and spermatozoa increased with age. All animals with 17.3 months of age or more had reached puberty in the present study and the first spermatozoa appeared in GII. The number of protein spots on cauda epididymal fluid gels was statistically similar from GI to GII (66 and 97 spots; p > 0.05) and from GII to GIII (97 and 139 spots; p > 0.05), but increased from GI to GIII (66 and 139 spots; p < 0.001). Altogether, this study indicates that age and testis size were related. With the exception of one animal, the onset of puberty started in the GII, coinciding with the first spermatozoa in lumen of the seminiferous tubules and epididymal flush, in 15.2 months old colts. The identified proteins have a close relationship with the development of spermatozoa and his fertilization capacity, which contributes to understand and confirm the development process of equine germ cells in the period of peri-puberty.