Melatonina : receptores de membrana e ação na expressão gênica das citocinas inflamatórias no útero de éguas

Abstract

A melatonina apresenta a capacidade de minimizar ou de até atenuar a atividade das vias inflamatórias responsáveis pela persistência do processo inflamatório. Apesar das éguas serem influenciadas pelo fotoperíodo, ainda é desconhecida a ação da melatonina no útero de éguas. Os objetivos desse estudo consistem: i) verificar a expressão gênica dos receptores MT1 e MT2 de melatonina no endométrio de éguas, e se a inflamação interfere na expressão de cada receptor. ii) citotoxicidade da melatonina em células endometriais nas concentrações de 0,5 mMol.L-1, 1 mMol.L-1, 2 mMol.L-1, 4 mMol.L-1 e 8 mMol.L-1. iii) verificar a influência da melatonina na expressão gênica das citocinas IL1-β, IL-6, IL-8, IL-10 e TNF-alfa em explantes uterinos de éguas em 6, 12 e 24 horas de cultivo. Cada objetivo foi dividido em três experimentos, sendo, o primeiro, realizado com 12 biópsias uterinas, metade derivada de uma infusão com 109 de espermatozoides vivos/mortos. O segundo experimento foi verificado a toxicidade da melatonina em células endometriais. O terceiro, com o uso das concentrações menos citotóxicas de melatonina, 54 explantes uterinos de três úteros foram cultivados por 6, 12 e 24 horas, expostos a uma suspensão espermática com 10 milhões de espermatozoides vivos/mortos por mililitro. Foi observado a expressão gênica dos receptores de membrana MT1 e MT2 no endométrio de éguas, porém o processo inflamatório com espermatozoides não foi capaz de interferir na síntese de RNAm. As concentrações menos citotóxicas foram as de 0,5 mMol.L-1 e 1 mMol.L-1. No experimento 3, não foi possível de se verificar a ação concreta da melatonina na expressão gênica relativa das citocinas inflamatórias, apesar de a IL1-β ter apresentado uma diferença nas 24 horas de cultivo. Provavelmente se o tempo de cultivo fosse de até 48 horas com o uso de espermatozoides poderia se ter certificado uma melhor dinâmica na expressão entre os tratamentos.

Melatonin can minimize or even attenuate the activity of inflammatory pathways responsible for the persistence of the inflammatory process. Although mares are affected by photoperiod, the effect of melatonin in the uterus of mares is still unknown. The objectives of this study are: i) to examine the gene expression of the melatonina receptors MT1 and MT2 in the endometrium of mares and determine whether inflammation affects the expression of each receptor. ii) cytotoxicity of melatonin in endometrial cells at concentrations of 0.5 mMol.L-1, 1 mMol.L-1, 2 mMol.L-1, 4 mMol.L- 1 and 8 mMol.L-1. (iii) To examine the effect of melatonin on gene expression of the cytokines IL1-β, IL-6, IL-8, IL-10, and TNF-alfa in uterine explants from mares after 6, 12, and 24 hours of culture. Each objective was divided into three experiments, the first using 12 uterine biopsies, half of which were derived from an infusion of 109 live/dead sperm. The second experiment checked the toxicity of melatonin in endometrial cells. In the third experiment, using the least cytotoxic concentrations of melatonin, 54 uterine explants from three uterine were cultured for 6, 12, and 24 hours and exposed to a sperm suspension containing 107 live/dead sperm per milliliter. Gene expression of the membrane receptors MT1 and MT2 was observed in the endometrium of mares, but the inflammatory process with the sperm was not able to affect the mRNA synthesis of the receptors. The least cytotoxic concentrations were 0.5 mMol.L-1 and 1 mMol.L-1. In experiment 3, it was not possible to verify the specific effect of melatonin.