Viabilidade oocitária e espermática em zebrafish (Danio rerio) post mortem

Abstract

A exploração excessiva dos ambientes aquáticos tem acarretado o declínio de diversas espécies de peixes, fazendo-se necessária a adoção de medidas mitigatórias que visem a proteção destes animais em risco de extinção. A remoção de gônadas de animais encontrados mortos, desde que sejam viáveis, pode ser uma alternativa de preservação dessas espécies, porém os efeitos do processo de post mortem na qualidade dos gametas de espécies aquáticas têm sido pouco estudados. Sendo assim, o objetivo do estudo foi avaliar os efeitos de três períodos do post mortem (pré- rigor mortis, rigor mortis e post rigor) em diferentes parâmetros de qualidade de oócitos e espermatozoides, utilizando como modelo o zebrafish. Os peixes foram eutanasiados por imersão em anestésico tricaína (0,6 mg/mL; 27°C ±0,5; pH 7,4) e mensurados de acordo com angulação em transferidor (180°), estabelecendo ângulos referentes a cada etapa do post mortem (fresco/controle–40°; pré-rigor mortis –35°; rigor mortis–0°; post rigor–40°), coletando os tecidos em cada etapa. As seguintes análises foram realizadas: viabilidade celular (SYBR-14/FDA/PI), atividade mitocondrial (MTT), morfologia espermática (Rosa de Bengala) e cinética de espermatozoides (CASA). Na atividade mitocondrial de oócitos e espermatozoides não houve diferença. No período do post rigor, todos os estágios de maturação oocitária apresentaram baixa viabilidade celular (5,145 - 15,22%). Não houve diferença entre os grupos na viabilidade dos espermatozoides (p=0,0822). Em contraste, no rigor mortis e post rigor, a motilidade espermática foi inferior à 20% (p<0,05) comparado ao pré-rigor mortis (58,96± 14,38%) e o fresco/controle (63,23 ± 19,03%). Os resultados de morfologia espermática mostram uma maior quantidade de anormalidades de cabeça nos períodos de rigor mortis e post rigor. No post rigor, além de cabeça degenerada (8,7 ± 2,29%), houve um aumento de microcefalia (8,4 ± 2,33%) e cauda curta (16 ± 5,13%). Esses resultados indicam que o rigor mortis seria o momento limite para a coleta e preservação de gônadas após a morte do animal, visto que no post rigor há uma perda da qualidade dos gametas de zebrafish.

Excessive exploitation of aquatic environments has led to the decline of several species of fish, making it necessary to adopt mitigation measures aimed at protecting these animals at risk of extinction. The removal of gonads from animals found dead, if they are viable, can be an alternative for the preservation of these species, however, the effects of the post-mortem process on the quality of gametes of aquatic species have been little studied. Therefore, the study's objective was to evaluate the effects of three post-mortem periods (pre-rigor mortis, rigor mortis, and post-rigor) on different quality parameters of oocytes and spermatozoa, using zebrafish as a model. The fish were euthanized by immersion in tricaine anesthetic (0.6 mg/mL; 27°C ±0.5; pH 7.4) and measured according to the angulation in a protractor (180°), establishing angles referring to each stage of the process post-mortem (fresh/control–40°; pre-rigor mortis –35°; rigor mortis–0°; post-rigor–40°), collecting tissues at each stage. The following analyzes were performed: cell viability (SYBR-14/FDA/PI), mitochondrial activity (MTT), sperm morphology (Rose Bengal), and sperm kinetics (CASA). There was no difference in the mitochondrial activity of oocytes and spermatozoa. In the post-rigor period, all oocyte maturation stages showed low cell viability (5.145 - 15.22%). There was no difference between groups in sperm viability (p=0.0822). In contrast, in rigor mortis and post-rigor, sperm motility was less than 20% (p<0.05) compared to pre-rigor mortis (58.96± 14.38%) and fresh/control (63.23 ± 19.03%). Sperm morphology results show a greater amount of head abnormalities in the periods of rigor mortis and post rigor. In post rigor, in addition to degenerated head (8.7 ± 2.29%), there was an increase in microcephaly (8.4 ± 2.33%) and short tail (16 ± 5.13%). These results indicate that rigor mortis would be the limit moment for collecting and preserving gonads after the animal's death, since in post rigor there is a loss of quality of zebrafish gametes.