Espécies de Dickeya associadas à batata-consumo e semente

Abstract

Bactérias do gênero Dickeya são patógenos de grande importância para a cultura da batata e têm como principal fonte de inóculo a batata-semente assintomática. A incidência destas bactérias vem aumentando no Brasil, porém não se tem ainda uma correta identificação das espécies envolvidas. Outro fato importante é que a espécie D. solani é considerada praga com alto potencial de prejuízo e a melhor estratégia de manejo é o uso de batatas-semente livres do patógeno. Para tanto, métodos sensíveis de detecção são necessários. O presente trabalho objetivou determinar as espécies de Dickeya associadas à batata, avaliar sua virulência nas cultivares Ágata e Asterix a diferentes temperaturas e detectar a presença de D. chrysanthemi, D. dianthicola e D. solani em batata-consumo e semente nacional e importada por qPCR. Duzentas e sete amostras [tubérculos (75) e plantas (10) de batata-consumo, tubérculos (59) e plantas (15) de batata-semente nacional e importada (48)] foram coletadas nos anos de 2010 a 2013, de diferentes regiões do Brasil e do Chile. Através de isolamento, testes bioquímicos, sistema BIOLOG GN2 (Biolog, Inc., Hayward, CA, USA), PCR com os oligonucleotídeos 1491f/L1rA/L1rG e ADE1/ADE2, e a análise das sequências parciais dos genes dnaX e mdh foi constatada a presença de D. dadantii em 9/85 amostras de batata-consumo e de D. solani em 5/74 amostras de batata-semente nacional. As estirpes de D. dadantii formaram um grupo heterogêneo baseado nos testes bioquímicos e a análise de sequencias. Quando tubérculos das cultivares Ágata e Asterix foram inoculados, não houve diferença na virulência entre as duas espécies, mas maceraram mais a 35 do que a 28 °C, sendo a cultivar Ágata mais suscetível. Duzentas e quatro e 182 amostras de tubérculos coletadas e armazenadas em cartões FTA (Whatman, GE) em 2007-9 e 2010-13, respectivamente, foram analisadas por qPCR com sonda TaqMan® para detecção de D. chrysanthemi, D. dianthicola e D. solani. D. solani foi detectada em 41 amostras nacionais (24 batata-semente e 17 consumo) e quatro do Chile, e D. dianthicola em nove amostras nacionais (duas batata-semente e sete consumo). D. chrysanthemi não foi detectada e D. dadantii e D. zeae não foram testadas. A detecção de D. dianthicola no Brasil por qPCR indica a necessidade de isolamento de estirpes e confirmação de sua identidade por outros métodos. Este é o primeiro relato da ocorrência de D. solani em batata no Brasil.

Dickeya spp. are important pathogenic bacteria on potato. The main source of inoculum is symptomless seed potato. There is evidence that the incidence of these bacteria is being increasing in Brazil but species involved are unknown. Another important fact is that Dickeya solani is considered a pest with high economic impact potential. The best managment strategy is the use of pathogen-free seed tubers. Therefore high-sensitive methods for detection of these bacteria are mandatory. The aim of this study was to determine Dickeya spp. associated to potato, to avaliate their virulence in Ágata and Asterix cultivars and to detect the presence of D. chrysanthemi, D. dianthicola and D. solani in ware potato and national and imported seed potato by qPCR. Two hundred and seven samples [tubers (75) and plants (10) of ware potato, tubers (59) and plants (15) of national seed-potato and imported (48)] were collected during 2010-2013, from different Brazilian regions and from Chile. Isolation, biochemical tests, BIOLOG GN2 (Biolog, Inc., Hayward, CA, USA), PCR with primers 1491f/L1rA/L1rG and ADE1/ADE2, and partial sequence analysis of dnaX and mdh genes allowed to confirm the presence of D. dadantii in 9/85 ware potato samples and of D. solani in 5/74 national seed potato. Strains of D. dadantii formed a heterogeneous group. When tubers of Ágata and Asterix cultivars were inoculated, there was no difference in virulence between the two species; nevertheless there was higher maceration at 35 than at 28 °C, being Ágata more susceptible. Two hundred and four and 182 samples collected and stored in FTA Cards (Whatman, GE), during 2007-9 and 2010-13, respectively were analyzed by qPCR with TaqMan® hydrolysis probe for the presence of D. chrysanthemi, D. dianthicola and D. solani. D. solani was detected in 41 national samples (24 seed potato and 17 ware potato) and four samples from Chile and D. dianthicola in nine national samples (two seed potato and seven ware potato). The presence of D. chrysanthemi was not detected and D. dadantii and D. zeae were not tested. The detection of D. dianthicola in Brazil by qPCR indicates the need of obtention of isolates and confirmation of strains identity by other methods. This is the first report of occurrence of D. solani in ware and seed potato in Brazil.