Doença de Marek em poedeiras comerciais vacinadas : relato de caso e análise metagenômica

Abstract

A doença de Marek (Marek’s disease, MD), é uma enfermidade oncogênica e imunossupressora, causada pelo Gallid alphaherpesvirus 2 (GaHV-2), que possui uma significativa importância econômica para a indústria avícola. Os encargos econômicos são por perdas diretas de mortalidade, condenações das carcaças de frangos ao abate, queda na produção de ovos e, bem como, indiretas pelo custo de prevenção da utilização generalizada de vacinas e medidas de controle. Os surtos esporádicos e repetidos nos últimos anos, principalmente em lotes de poedeiras comerciais e matrizes pesadas vacinadas, tem ocorrido em diferentes países e continentes. No Brasil, há poucos relatos e informações a respeito da ocorrência da enfermidade. O diagnóstico da MD e diferencial a outras doenças oncogênicas, envolve os sinais clínicos, lesões macroscópicas, histopatologia e técnicas moleculares. Novas abordagens como a metagenômica têm sido propostas para auxiliar no conhecimento do agente etiológico e suas interações com o microbioma das aves. O sequenciamento de alto desempenho (high throughput sequencing; HTS) ou de nova geração (Next Generation Sequencing; NGS), com o apoio de ferramentas de bioinformática, tornam possível a utilização da abordagem metagenômica para identificar o microbioma de uma determinada amostra biológica, independentemente de cultivo dos microrganismos. Visando contribuir para o conhecimento da MD no Brasil e a interação do vírus imunossupressor GaHV-2 sobre o microbioma das aves, no presente trabalho foi apresentado um relato de um surto esporádico da MD em poedeiras comerciais e análises metagenômicas de órgãos de poedeiras comerciais saudáveis ou afetadas pela MD. A tese está dividida em três capítulos. O primeiro capítulo apresenta uma revisão bibliográfica sobre a MD. O segundo capítulo, intitulado “Um surto da doença de Marek em poedeiras comerciais vacinadas, no sul do Brasil”, descreve um relato sobre os achados epidemiológicos, clínicos, patológicos e moleculares em um surto esporádico da MD em poedeiras comerciais vacinadas. Os resultados demonstraram que o surto esporádico foi caracterizado como MD tardia em poedeiras comerciais adultas, na epidemiologia pela ocorrência às 38 semanas de idade, e classificado como síndrome neoplásica induzida pelo MDV. A presença de uma cepa patogênica do GaHV-2 foi confirmada e maiores cargas virais encontrads em tecidos com lesões e tumores. A infecção pelo GaHV-2 continua causando, mesmo em aves vacinadas para a MD, sinais clínicos e lesões características, e consequentemente, pela mortalidade e queda na produção de ovos, perdas econômicas aos produtores e a indústria de ovos, no sul do Barsil. A ocorrência deste surto esporádico da MD sugere estar associada as falhas de biosseguridade e vacinação. Por fim, o terceiro capítulo, intitulado “Análises metagenômicas em poedeiras comerciais saudáveis ou afetadas pela doença de Marek” descreve a utilização do NGS para analisar o microbioma de órgãos de poedeiras comerciais saudáveis e comparar estes achados com os obtidos em aves afetadas pela MD. Os achados deste estudo indicam que poedeiras comerciais afetadas pela MD possuem maior abundância de genomas representativos de famílias virais e bacterinas em órgãos, do que aves saudáveis. A infecção pelo GaHV-2 conduziu a uma modulação do microbioma dos órgãos das aves, favorecendo coinfecções por bactérias patogênicas de interesse em saúde pública.

Marek's disease (MD) is a lymphoproliferative disease, caused by Marek's disease virus (MDV), formally Gallid alphaherpesvirus 2 (GaHV-2). MD control is based on selection of genetically resistant animals, biosecurity measures and vaccination. In Brazil, outbreaks of MD have occurred in vaccinated commercial layers and broiler breeders. The present study reports epidemiological, clinical, pathological and molecular findings in a sporadic outbreak of DM in commercial layers vaccinated with Rispens/CVI988 and HVT/FC-126 strains, which occurred on a farm in southern Brazil. In a flock of 22,323 layers, at 38 weeks of age, 35 birds showed signs of neurological impairment, mortality and decreased egg production. A first detection of the GaHV-2 and Rispens/CVI988 genomes was performed by PCR and subsequently a qPCR for amplification of GaHV-2 and HVT/FC-126. A prevalence of 1.72%, mortality of 0.33%/week and accumulated mortality of 9%, reduction in egg production of 2.24%/week and 0.44% of the total were observed. The neurological clinical signs were unilateral and complete paralysis of the legs, with consequent locomotor difficulty, and others, such as depression, lethargy and diarrhea. The macroscopic lesions were enlargement of the sciatic nerve and nodular and diffuse tumors in the organs and histopathological findings included pleomorphic lymphocytes between the nerve fibers of the sciatic nerve and in organs. A fragment (566 bp) of the genome of a virulent GaHV-2 strain was amplified in 4 of 10 organ pools (liver, spleen, ovary, kidneys and skin) (40%), and negative for the Rispens/CVI988 vaccine strain. At qPCR, HVT/FC126 was detected in 6 of 10 organ pools (60%), with 2 pools in birds affected by MD and 4 in healthy birds. GaHV-2 genomes were detected in higher numbers (18/19; 94.74%) and with higher viral loads (106.19 copies) in MD affected birds than in healthy birds (1/16; 6.25%; 100.8 copies). The sporadic outbreak was characterized as late MD in adult commercial layers, in epidemiology by occurrence at 38 weeks of age, and classified as MDV-induced neoplastic syndrome. PCR and qPCR revealed that pathogenic GaHV-2 is circulating, and imposes economic losses on producers and the egg industry in southern Brazil, and the occurrence of MD suggests being associated with biosecurity and vaccination failures.