Tipificação molecular e avaliação da resistência de Salmonella Heidelberg isoladas de carcaças de frango

Abstract

Atualmente, no Brasil, Salmonella Heidelberg tem sido isolada, com maior frequência, em abatedouros frigoríficos de aves, despertando preocupação. Em diversos países, esse sorovar tem provocado surtos alimentares importantes, demonstrando ser mais virulento e multirresistente do que outros sorovares de Salmonella. Este estudo teve como objetivos realizar a tipificação molecular de 173 S. Heidelberg, isoladas de produtos de frango de um abatedouro avícola, e avaliar a resistência a antimicrobianos e a sanitizantes comumente utilizados em indústria de carne. A tipificação molecular foi realizada por PCR-Ribotipificação. A avaliação da resistência a antimicrobianos foi realizada através da técnica de disco-difusão, enquanto que a avaliação dos sanitizantes ácido peracético e quaternário de amônio foi realizada tanto com células em suspensão, quanto com células aderidas ao aço inoxidável AISI 304. Com a PCR-Ribotipificação foram identificados três perfis, com duas, três e quatro bandas de DNA, e, com o ensaio de susceptibilidade, vinte e oito perfis de resistência distintos. Dentre os isolados, 86% apresentaram característica de multirresistência, ou seja, foram resistentes a três ou mais classes de antimicrobianos. Esses dados foram cruzados com a tipificação molecular e um dendrograma reuniu as cepas em oito clusters, revelando expressiva diversidade de cepas de S. Heidelberg nos produtos avícolas. Um representante dos cinco principais clusters foi utilizado para avaliar a resistência aos sanitizantes. Cerca de 7 log UFC/mL de S. Heidelberg foram totalmente inativados, nos primeiros cinco minutos de contato, no ensaio com células em suspensão, com ambos sanitizantes testados. Resultados diferentes foram obtidos com as células aderidas, uma vez que o ácido peracético reduziu 2 log de UFC/cm2, dos cerca de 4 log UFC/cm2 iniciais, nas concentrações de 555ppm (0,18%) e 1110ppm (0,37%), com 1 minuto de contato. No entanto, este sanitizante, após 10 minutos de contato nas mesmas concentrações, inativou todas as células de S. Heidelberg aderidas. Na concentração de 1481ppm (1%), nos tempos de 1 e 10 minutos de contato, o ácido peracético inativou totalmente as células aderidas. O sanitizante quaternário de amônio só foi capaz de inativar todas as células aderidas, dentre as diluições testadas, na concentração de 4000ppm (2%). Com base nos resultados, pode-se concluir que há ampla variedade de cepas de S. Heidelberg contaminando os produtos avícolas avaliados, sugerindo também diversidade de fontes de contaminação. Além disso, os sanitizantes ácido peracético e quaternário de amônio foram capazes de inativar os micro-organismos quando as concentrações recomendadas pelos fabricantes foram utilizadas.

Salmonella Heidelberg in Brazil has currently been isolated, often at poultry slaughterhouses arising worries. In many countries, this sorovar has caused important foodborne outbreaks showing to be much more virulent and multidrug resistant (MDR) than some other Salmonella serovars. The aim of this study is to carry out molecular typification 173 S. Heidelberg, isolated from chicken products from a poultry slaughterhouse. Moreover, evaluate the antimicrobial and sanitizers resistance usually used in meat industries. Molecular typification was performed by PCR-Ribotyping. Antimicrobial resistance evaluation carried out through disc diffusion, meanwhile, the peracetic acid and quaternary ammonium sanitizers evaluation was carried out not only with suspension cells, but also with stainless steel AISI 304 adhered cells. Through the PCR-Ribotyping three (3) profiles were identified, with two (2), three (3) and four (4) bands of DNA and with the antimicrobial susceptibility method, 28 different resistance profiles. Among the isolates, 86% showed MDR to at least three different antimicrobial classes. These data were correlated with molecular typification and a dendrogram brought together the strains in eight (8) clusters, presenting significant S. Heidelberg strain diversity in poultry products. A sample of each one of the main five (5) clusters was used to evaluate the resistance to sanitizers. Nearly 7 log UFC/ml of S. Heidelberg were totally inactivated during the first 5 (five) minutes of contact, by suspension cells approach. On the other hand, different results were gained with adhered cells. Once, the peracetic acid decreased 2 log UFC/cm2 of the initial 4 log UFC/cm2, in different concentrations of 555ppm (0,18%) and 1110ppm (0,37%) with a minute of contact. Nevertheless, this sanitizer after 10 minutes of contact, in these concentrations, inactivated all S. Heidelberg adhered cells. In the concentration of 1481ppm (1%), at the time of 1 (one) and 10 minutes, the peracetic acid inactivated fully the adhered cells. The quaternary ammonium sanitizer was only able to inactivate all the adhered cells, among the dilutions tested, in the concentration 4000ppm (2%). Based on the results, it is concluded that there is a broad variety of S. Heidelberg strains infecting the poultry products evaluated, also suggesting diversity of contamination sources. Nonetheless, the sanitizers, peracetic acid and the quaternary ammonium were able to inactivate the microorganisms when the concentrations recommended by its producers were used.