Suscetibilidade in vitro e in vivo da terbinafina, itraconazol, caspofungina, ibuprofeno e fluvastatina, em combinações duplas e triplas, frente a Pythium insidiosum

Abstract

Pythium insidiosum, um micro-organismo do Reino Stramenopila, é o agente etiológico da pitiose em mamíferos, uma doença difícil de tratar. O presente estudo investigou a atividade inibitória in vitro da terbinafina, itraconazol, caspofungina, fluvastatina e ibuprofeno contra 15 isolados brasileiros de P. insidiosum em combinações duplas e triplas e determinou as correlações in vivo usando coelhos com pitiose experimental. Além disso, este estudo objetivou relatar o crescimento paradoxal de isolados de P. insidiosum quando submetidos a testes de suscetibilidade in vitro com caspofungina. A concentração inibitória mínima (CIM) foi determinada pelo protocolo M 38-A2 do Clinical and Laboratory Standards Institute, e as interações in vitro foram avaliadas usando um método de microdiluição checkerboard. Para o estudo in vivo, 20 coelhos inoculados com zoósporos de P. insidiosum foram divididos em quatro grupos: o grupo 1 foi tratado com terbinafina e itraconazol; o grupo 2 foi tratado com terbinafina, itraconazol e fluvastatina; o grupo 3 foi tratado com terbinafina e caspofungina; e o grupo 4 foi o grupo controle. As combinações de terbinafina com caspofungina ou ibuprofeno foram sinérgicas para 47% dos isolados, e antagonismo não foi observado em nenhuma das combinações duplas. As combinações triplas foram principalmente indiferentes, mas sinergismo e antagonismo também foram observados. O crescimento paradoxal foi observado em 50% dos isolados testados a concentrações acima da CIM variando de 16 a 128 mg/ml. No estudo in vivo, o aspecto histológico das lesões foi similar entre os grupos, mas o grupo 2 mostrou a menor quantidade de hifas e diferiu significativamente dos outros grupos. Os melhores resultados in vivo foram observados quando utilizada a combinação tripla de terbinafina, itraconazol e fluvastatina (grupo 2). O presente estudo foi o primeiro estudo de suscetibilidade in vitro e in vivo com P. insidiosum usando combinações de três fármacos, e o fenômeno do efeito paradoxal envolvendo oomicetos foi descrito aqui pela primeira vez.

Pythium insidiosum, a fungus-like microorganism of the Stramenopila kingdom, is the etiological agent of pythiosis in mammals, a difficult disease to treat. The present study investigated the in vitro inhibitory activity of terbinafine, itraconazole, caspofungin, fluvastatin and ibuprofen against 15 isolates of Brazilian P. insidiosum in double and triple combinations and determined in vivo correlations using rabbits with experimental pythiosis. Furthermore, this study aimed to report the paradoxical growth of P. insidiosum strains when submitted to in vitro susceptibility tests with caspofungin. The minimal inhibitory concentration (MIC) was determined by the Clinical and Laboratory Standards Institute M 38-A2 protocol, and the in vitro interactions were evaluated using a checkerboard microdilution method. For the in vivo study, 20 rabbits inoculated with P. insidiosum zoospores were divided into four groups: group 1 was treated with terbinafine and itraconazole; group 2 was treated with terbinafine, itraconazole and fluvastatin; group 3 was treated with terbinafine and caspofungin; and group 4 was the control group. Combinations of terbinafine with caspofungin or ibuprofen were synergistic for 47% of the isolates, and antagonism was not observed in any of the double combinations. The triple combinations were mostly indifferent, but synergism and antagonism were also observed. The paradoxical growth was observed in 50% of the isolates tested at concentrations above the minimal inhibitory concentration (MIC) ranging from 16 to 128 mg/ml. In the in vivo study, the histological aspect of the lesions was similar among the groups, but group 2 showed the lowest amount of hyphae and differed significantly from the other groups. The best in vivo results were observed using the triple combination of terbinafine, itraconazole and fluvastatin (group 2). The present study was the first study of in vitro and in vivo susceptibility of P. insidiosum using combinations of three drugs, and the phenomenon of paradoxical effect involving oomycetes was described here for the first time.