Perfil proteico do fluido folicular durante a foliculogênese da égua

Abstract

O fluido folicular (FF) é um líquido extracelular complexo que se acumula no antro dos folículos ovarianos durante o seu desenvolvimento. É o meio essencial para o crescimento e a maturação das células ovarianas somáticas e germinativas e contém substâncias envolvidas na diferenciação celular, maturação do oócito, qualidade do gameta, ruptura da parede folicular e luteinização. O estudo de seus componentes é fundamental para um melhor entendimento dos mecanismos que envolvem a dinâmica folicular na espécie equina. O objetivo deste trabalho foi comparar o perfil proteico do maior folículo, e entre o maior e o segundo maior folículo, em diferentes momentos do desenvolvimento folicular. Para este estudo, quarenta ovários, oriundos de vinte éguas Crioulas, não gestantes e cíclicas, foram coletados durante a estação reprodutiva, em um abatedouro. Antes do abate, as éguas foram divididas em quarto grupos de acordo com o diâmetro folicular, ecotextura uterina (EU) e presença de corpo lúteo (CL): G 15 (emergência) (n = 3) folículos até 15 mm, EU ≥ 1, CL ≥ 20 mm; G 20 (divergência) (n = 9) folículos entre 20 e 25 mm, EU 1-2, CL 15-20 mm; G 30 (dominância) (n = 4) folículos entre 30 e 35 mm, EU ≥ 2, CL ≤ 15 mm; G 40 (pré-ovulatória) (n = 4) folículos ≥ 40 mm, EU 2-3, CL ≤ 15 mm. Após o abate, os ovários foram coletados e o FF dos dois maiores folículos foi aspirado. A técnica de 2D-PAGE foi realizada, em duplicata, utilizando gel de acrilamida a 12%. Os géis foram corados com Comassie Brilliant Blue R-250, escaneados e analisados, utilizando o PDQuest software, para determinar a densidade óptica dos spots. A identificação proteica foi realizada através de espectometria de massa (MS). Um total de 43 spots foi observado. Sete spots, representando cinco proteínas (albumina, apolipoproteína A-1, gelsolina, transferrina e α-1-antiproteinase 2), apresentaram diferenças (P˂0,05) na expressão, no FF do maior folículo, nos diferentes grupos. Um spot, representado pela proteína POMZP3, demonstrou diferença (P=0,018) em sua expressão, entre o maior e o segundo maior folículo, nos diferentes grupos. E, por fim, um spot, identificado como a proteína α-1-antiproteinase 2, apresentou interação (P=0,047) entre o maior e o segundo maior folículo e as diferentes fases da foliculogênese. Os resultados deste trabalho demonstram que o perfil proteico do FF difere durante o desenvolvimento folicular e que, as maiores alterações, são observadas a partir da dominância. Além disso, provavelmente, algumas destas proteínas, bem como suas correlações, tenham grande importância nos eventos que ocorrem durante a foliculogênese.

The follicular fluid (FF) is a complex extracellular fluid that accumulates in the antrum follicles during the follicular development. It is the essential medium for the growth and maturation of somatic and germ ovarian cells and contains substances involved in cell differentiation, oocyte maturation, gamete quality, rupture of the follicle wall and luteinization. The study of its components is crucial for a better understanding of the mechanisms involved in follicular dynamics in mares. The objective of this study was to determine the protein profile of the largest follicle and among the largest and the second largest follicle at different stages of follicular development. In this study, 40 ovaries from 20 non pregnant Criollo cycling mares were collected during the breeding season in an abattoir. Before slaughter, the mares were divided into four groups according to follicular diameter, uterine ecotexture (UE) and the presence of corpus luteum (CL): G 15 (emergence) (n = 3), follicles up to 15mm, EU ≥ 1, CL ≥ 20 mm; G 20 (deviation) (n = 9), follicles between 20 and 25 mm, EU 1-2, CL 15-20 mm; G 30 (dominance) (n = 4), follicles between 30 e 35 mm, EU ≥ 2, CL ≥15 mm; G 40 (ovulation) (n = 4), follicles ≥ 40 mm, EU 2-3, CL ≥ 15 mm. After slaughter, the ovaries were collected and the FF of the two largest follicles was aspirated. The technique of 2D-PAGE was performed in duplicate using 12% acrylamide gel. Gels were stained with Comassie Brilliant Blue R-250, scanned and analyzed using the PDQuest software to determine the optical density of the spots. Protein identification was performed by mass spectrometry (MS). A total of 43 spots was observed. Seven spots representing five proteins (albumin, apolipoprotein A-1, gelsolin, transferrin e α-1-Antitrypsin 2) showed differences (P˂0.05) in expression, the FF of the largest follicle in the different groups. One spot, represented by POMZP3 protein showed a difference (P=0.018) in expression between the largest and second largest follicle in the different groups. Finally, one spot, identified as the protein α-1-antitrypsin 2, showed interaction (P=0.047) between the largest and second largest follicle. The results of this study demonstrated that the protein profile of FF differs during follicular development and that the largest changes are observed from the dominance. Also probably some of these proteins, as well as their correlations, have great importance in the events that occur during folliculogenesis.