Indução da ovulação com hcg e acetato de deslorelina altera o perfil proteico do líquido folicular de éguas

Abstract

O líquido folicular é o microambiente do oócito durante sua maturação in vivo que é, em parte constituído por exsudato do soro sanguíneo e por substâncias produzidas localmente, que estão relacionados com a atividade metabólica das células ovarianas. Tais substâncias podem ser essenciais para a proliferação e diferenciação das células somáticas bem como na maturação e posterior fertilização de um oócito competente. A busca por biomarcadores capazes de predizer a saúde de um folículo ou a capacidade do oócito em se tornar um embrião saudável é objeto de estudo na medicina reprodutiva humana e veterinária. Para tanto é essencial o conhecimento a nível molecular dos constituintes do liquido folicular e suas funções. O objetivo do presente estudo foi avaliar o perfil proteico do líquido folicular de éguas submetidas à indução de ovulação, com dois diferentes protocolos usuais na prática clínica, utilizando eletroforese bidimensional em gel de poliacrilamida. Para tanto 19 amostras de liquido folicular de éguas que tiveram sua ovulação induzida por dois diferentes protocolos (1000UI hCG IV, Grupo H, ou 1000UI hCG IV + 1,5mg de acetato de deslorelina IM, Grupo H + G) foram submetidos a eletroforese 2D e posterior análise dos géis no PDQuest. Os valores de proteína total foram significativamente diferente nos Grupo H e Grupo H+G, 63,97 ± 6,97 e 73,07 ± 6,42, respectivamente. O número máximo de spots em um mesmo gel foi de 157 e o mínimo de 34, com média de 90 spots para o Grupo H e 83 spots para o Grupo H+G. Os 19 géis foram avaliados e a porcentagem máxima de spots relacionados foi de 52% e a mínima de 0%. Com média de 37,8% de similaridade entre spots para o Grupo H e 22% para o Grupo H+G. Estes resultados são de grande importância devido à escassez de trabalhos com proteômica de liquido folicular de éguas induzidas a ovulação e demonstram que a associação entre hCG e acetato de deslorelina aumenta a concentração de proteínas no líquido folicular em folículos pré-ovulatórios (>35 mm).

Follicular fluid is the oocyte microenvironment during its in vivo maturation. It is partly composed by blood serum exudate, and also by locally produced substances, related to ovarian cells metabolic activity. These substances may be essential for somatic cells proliferation and differentiation, as well as on the oocyte maturation and fertilization. The search for biomarkers able to predict oocyte ability to grow into a healthy embryo are targets on human and veterinary reproductive medicine. It is essential to know the components of follicular fluid and their functions. The aim of the present study was to evaluate protein profile of the follicular fluid in mares with inducted ovulation, in two different protocols, using 2D electrophoresis in polyacrylamide gel. 19 follicular fluid samples from mares in which ovulation induction was performed with two different protocols (1000UI hCG IV or 1000UI hCG IV + 1,5mg deslorelin acetate IM), submitted to 2D electrophoresis, and gel analysis on PDQuest. Total protein values were significantly different in Group H and Group H+G, 63,97 ± 6,97 and 73,07 ± 6,42, respectively. The highest number of spots on a same gel was 157 and the minimum was 34, with a mean of 90 spots to Group H and 83 spots for Group H+G. All of the19 gels were evaluated according to MasterGel and the highest percent of related spots was 52% and the lowest, 0%, with mean similarity between spots 37,8% to Group H and 22% to Group H+G. These results are of great importance, due to lack of works on follicular fluid proteomics using fluid from mares with induced ovulation, and demonstrate that the association hCG + deslorelin acetate increase proteins concentration on pre-ovulatory follicles fluid.