A influência da dieta em frangos de corte sobre a colonização intestinal por cloristridium perfringens avaliada através de quantificação por um método analítico alternativo

Abstract

Microrganismos do gênero Clostridium, particularmente Clostridium petfringens, permanecem como um grave problema na avicultura mundial, do ponta de vista de saúde animal, de saúde pública tanto quanto econômico. O Clostridiurn perfrngens é considerado um habitante comensal do trato intestinal de frangos de corte, no entanto, quando submetidos a alteraçóes na dieta ou mesmo então após a abolição de determinados promotores de crescimento pela Comissão das Comunidades da União Européia, o controle da população microbiana tornou-se reduzido. Uma dieta rica em grãos. trigo, cevada, e arroz aumentam a viscosidade intestinal através do aumento da produção de muco, como conseqüência do aumento de retenção de água no Iúmem intestinal e pela ausência de enzimas capazes de agir sobre os produtos da digestão destes carboidratos. De fato, o aumento do crescimento microbiano comprometem as funçóes da mucosa intestinal. A partir destes fatores, o presente trabalho tem como objetivo quantificar Clostridium perfrngens em duas diferentes dietas com e sem promotor de crescimento, utilizando um método analítico alternativo em dois segmentos do trato intestinal de frangos de corte. Para avaliar este método foi proposto a inclusão de alguns critérios de verificação do protocolo de validação para métodos microbiológicos alternativos, métodos quantitativos, referenciados na NordVal Validation (2005). Para avaliar o efeito das dietas foram analisadas 73 aves quanto a presença de Clostridium periringens pelo método bacteriológico convencional segundo MAPA e BAM adaptados de acordo com a natureza da amostra no laboratório do CDPA-UFRGS pelo seguinte protocolo: l g de inóculo de raspado de ileo e 1 g de conteúdo cecal acondicionados em 9 mL de água peptonada tamponada 0,1%, diluição 1:10, homogenizados e diluídos até a diluição 10º , posteriormente mantidos em banho-maria a 80°C durante 10 minutos seguido de refrigeração em água a 20°C. aliquotas de 1 mL eram inoculadas em ágar TSC e incubados a 37" C por 24 horas. Foram analisados 4 tratamentos: T1- dieta vegetal com promotor de crescimento, T2- dieta vegetal sem promotor de crescimento, T3- dieta vegetal milho e soja mais produtos de origem animal com promotor de crescimento e T4- dieta vegetal milho soja mais produtos de origem animal sem promotor de crescimento. A dieta do tratamento 3 obteve menor quantificação para Clostridium perfrngens nas diferentes idades de coleta. Algumas combinações de amostras intestinais diferiram com maior destaque. As amostras 26, 28, 42 e 48 são consideradas significativas com valores menores que o nível de 10% de significância (<0,10) - para interações triplices utiliza-se um nível de significância maior. Podemos considerar que a partir do 16" dia de idade iniciou a multiplicação de Clostridium perfringens no trato intestinal das aves e a partir do 25º dia de idade ocorreu uma redução mais significativa no ceco e íleo. Os ensaios para verificação do limite de detecção do método usado para ileo e ceco demonstraram um intervalo de detecção entre >40 células e c421 células por mL. Desta forma o método demonstrou um limite de detecçáo por perda de recuperação de células nas matrizes de ceco indicando que os resultados são quantitativamente maiores nas amostras. Possivelmente fatores interferentes tais como, analíticos, redução de ph, ácidos graxos de cadeia curta, exposição ao oxigênio podem ter interferido sob a recuperação das células.

Microorganism of the genus Clostridium particularly Clostridium perfringens, rernain a serious problern to the world's poultry industry, in aspects not only of animal and hurnan health but alço econornical. Clostridium perfringens considered a co mensal inhabitant of the intestinal tract of broiler chickens, however when subjected to diet alterations or even after elimination of certain growth prornoters by the Cornmission of the European Cornmunities, the control of the rnicrobial population has become reduced. A diet rich in grains such as wheat, barley and rice, increase the intestinal viscosity through increasing the production of mucous as a consequence of water retention in the intestinal lumen and the absence of enzyrnes capable of acting upon the products of the digestion of these carbohydrates. In fact, microbial growth affects the intestinal rnucous function. Based on these factors the following study has the objective to analyze the influente of two diets with or without growth prornoters under the evaluation of a new method for the isolation and quantification of Clostridium perfringens in two segrnents of the gastrointestinal tract of broiler chickens. To evaluate this method there were proposed the inclusion of some verification criteria for the validation protocol in alternative rnicrobiological methods, quantitative rnethods referred to in NordVal Validation (2005). To evaluate the effect of the diets, 73 birds were analyzed as to the presence of Clostridium perfrngens using the conventional bacteriological method according to MAPA and BAM adapted to the type of sample in the CDPAIUFRGS laboratory using the following protocol: l g of scraped inoculurn of the ileurn and 1 g of cecurn content suspended in 9 rnL of peptonated and parnptonated water at 0,1%, dilution 1:10, homogenized and diluted to 10". later maintained in a hot water bath of 80°C during 10 rninutes followed by refrigeration in water at 20°C, samples of 1 mL were suspended in agar TSC and incubated at 37" C for 24 hours. Four different treatments were analyzed: TI- vegetable diet with a growth promoter, T2- vegetable diet without a growth promoter, T3- vegetable diet of corn and soy beans with animal originated products and a growth promoter and T4- vegetable diet of corn and soy beans with animal originated products without a growth promoter. The diet of treatment 3 obtained the lowest quantification for Clostridium perfrngens at different collection times. Some combinations of ileum samples had outstanding differences. Samples 26,28, 42 and 48 are considered significant with values lower than the 10% level of significance (>0,10) -for the triple interactions a greater level of significance is utilized. We may consider that from the 16th day of development the multiplication of Clostridium perfringens began, in the gastrointestinal tract of the chickens and from the 25th day of development there occurred a more significant reduction in the ileum and cecum. The practices to verify the limit of detection of the method used for the ileum and cecum demonstrated an interval of detection between >40 cells and c421 cells per mL. As such, the method showed a limit of detection per loss of cell recuperation in the cecum matrix indicating results that are quantitatively greater in the samples. Possibly, interfering factors such as analyiical, reduction of ph, short-chain fatty acids, exposure to oxygen could have interfered with the recuperation of cells.