Efeitos da fototerapia com laser de baixa potência em células tronco mesenquimais de polpa dentária de rato Wistar

Abstract

O tratamento com laser de baixa potência, também chamado de fototerapia de baixa potência (FTBP) tem sido utilizado por profissionais de diversas áreas da saúde, com o objetivo de acelerar o processo de cicatrização e regeneração, tanto em tecidos moldes com duros. Essa terapia também pode ser aplicada sobre culturas de células, que, quando irradiadas, sofrem aumento na proliferação celular e atividade mitocondrial, fazendo com que haja maior síntese de proteínas, RNA e DNA. Contudo, a ausência de padronização nos protocolos, aliado a diversidade de equipamentos de laser utilizados, densidade de energia, força e tempo de irradiação inviabiliza a extrapolação e comparação dos resultados apresentados. Por esse motivo, o objetivo desse trabalho foi avaliar o comportamento das células tronco mesenquimais de polpa dentária de rato Wistar (rDPSC) frente a seis diferentes protocolos de irradiação. Foram empregados dois protocolos para déficit nutricional de soro fetal bovino (SFB), de 2% e 10%, e a irradiação foi realizada com dois comprimentos de onda (λ) 660nm e 904nm. Para avaliação da migração celular, atividade mitocondrial e proliferação celular, e da integridade do DNA, foram realizados os ensaios de wound healing, MTT (brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-yl)-difeniltetrazólio) e coloração nuclear com DAPI (4',6- diamidino-2-fenilindol), respectivamente. Os resultados obtidos mostraram que quando as células são irradiadas múltiplas vezes ao dia, com intervalo de 6h, com déficit nutricional de 2% de SFB e com mudança do meio para 10%, após a última irradiação, há aumento significativo na proliferação e atividade mitocondrial. Entretanto, com relação a migração celular, verificou-se a necessidade de estender o tempo de observação inicial pré-estabelecido de no mínimo três dias, uma vez que a maior taxa migratória ocorreu no sexto dia de FTBP, com melhores resultados utilizando o laser no comprimento de λ=904nm. Independente do protocolo utilizado, o DNA das rDPSC permaneceu íntegro. Desta forma, podemos concluir que a utilização deste protocolo experimental de irradiação potencializou a taxa proliferativa e migratória das rDPSC tornando-se uma alternativa adequada para futuros ensaios in vivo que envolvem esta fonte de célula tronco.

Treatment with low-power laser, also called low-power phototherapy (LLLT) has been used by professionals from different areas of health, in order to speed up the healing process and regeneration, both molds with hard tissues. This therapy can also be applied to cell cultures which, when irradiated, undergo cell proliferation and increased mitochondrial activity, so that there is increased synthesis of proteins, RNA and DNA. However, the lack of standardization in the protocols, coupled with the diversity of laser equipment used, energy density, strength and irradiation time prevents extrapolation and comparison of the results presented. Therefore, the aim of this study was to evaluate the behavior of mesenchymal stem cells from dental pulp of Wistar rat (rDPSC) against six different irradiation protocols. Two protocols were employed for nutritional deficit fetal bovine serum (FBS), 2% to 10%, and irradiation was performed with two wavelengths (λ) 660nm and 904nm. For evaluation of cell migration, cell proliferation and mitochondrial activity and DNA integrity, the wound healing studies were performed, MTT (3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -difeniltetrazólio) and nuclear staining DAPI (4 ', 6- diamidino-2-phenylindole), respectively. The results showed that when the cells are irradiated multiple times a day with an interval of 6 hours, with malnutrition 2% FBS and the medium changing to 10% after the last irradiation, no significant increase in proliferation and mitochondrial activity . However, in relation to cell migration, there is a need to extend the time of pre-set initial observation of at least three days, once the migration rate higher on the sixth day FTBP, with the best results using the laser in λ = 904 nm length. Regardless of the protocol used, the DNA of rDPSC remained intact. Thus, we can conclude that the use of this experimental protocol irradiation enhanced the proliferative rate and migration of rDPSC making it a suitable alternative for future in vivo assays involving this source of stem cells.