Mudanças no útero da égua após a infusão de fragmentos de conceptos

Abstract

A Comunicação materno embrionária equina ainda tem um pobre entendimento. Mudanças histológicas, vasculares e proteicas na prenhez inicial tem sido reportadas. O objetivo do presente trabalho foi determinar mudanças histológicas, vasculares e proteicas, comparando o endométrio e o liquido endometrial de éguas no sétimo dia após ovulação com éguas nas quais no quinto dia após ovulação foram infundidos fragmentos de conceptos de 13 dias. No presente estudo, foram utilizadas 10 éguas sadias e cíclicas, onde uma vez detectado o estro, as éguas foram examinadas diariamente até detectar a ovulação, sendo classificado como o dia 0. Após a ovulação, as éguas foram examinadas por palpação e ultrassonografia modo B e Doppler até o dia 7. Neste primeiro ciclo, liquido uterino e biopsias intrauterinas foram coletas no dia 7 após a ovulação, conformando o grupo Cíclico (n=10). No segundo ciclo, as mesmas éguas foram examinadas diariamente até detectar novamente a ovulação. Aos 5 dias pós-ovulação, fragmentos de conceptos de dia 13, que haviam sido previamente coletados, foram infundidos no útero de cada égua. Liquido uterino e biopsias endometriais foram coletadas no dia 7 pós-ovulação, compondo o grupo Fragmento (n=10). As éguas foram examinadas diariamente por ultrassonografia Power Doppler e Spectral Doppler desde a ovulação até o dia 7, nos dois ciclos. Biopsias foram divididas e armazenadas em solução de glutaraldeído a 2.5% para microscopia eletrônica de varredura e solução de paraformaldeído tamponado a 4% para estudos histológicos. Liquido uterino foi submetido a 2D-PAGE eletroforese, gerando géis que foram analisados e comparados. Os Spots com diferenças (P < 0.01) foram removidos, tripsinizados, liofilizados e submetidos a espectrometria de massa (LC-MS/MS e MALDI-TOF/TOF) e identificação. Observou-se uma diminuição na porcentagem de células ciliadas e planas no grupo Fragmento em relação ao grupo Cíclico. No entanto, células ingurgitadas, secreção superficial e intraglandular, lúmen e diâmetro glandular, diâmetro dos vasos sanguíneos, vascularização endometrial e células imunes foram maiores no grupo Fragmento do que no grupo Cíclico. Mudanças na abundancia das proteínas do líquido uterino foram identificadas por 2D-PAGE. 13 proteínas foram identificas por espectrometria de massa: Albumina, Apolipoproteina A1, Fator de complemento B, Fibrinogênio B, Fibrinogênio G, Hemopexin, IGL, IGHCp, IGHC1, Lipocalina 2, Serpin B1, Serotransferrin e Serotransferrin-semelhante. Mudanças histológicas e proteicas e suas interações sugerem novos achados para um melhor entendimento da comunicação materno-embrionária.

Equine maternal-embryonic communication still has poor understanding. Histological, vascular and protein changes in early pregnancy have been reported. The aim of the present study was to determine histomorphological, vascular and protein changes, comparing endometrium and uterine fluid of mares at 7th day after ovulation with mares in which at 5th day after ovulation were infused conceptus fragments of 13 days. In the present study, ten healthy and cyclic mares were used, where once estrus was detected, the mares were examined daily until ovulation was detected, being classified as day 0. After ovulation the mares were examined by palpation and ultrasonography mode B and Doppler since to day 7. In this first cycle, uterine fluid and intrauterine biopsies were collected on day 7 after ovulation, forming the Cyclic group (n = 10). In the second cycle, the same mares were examined daily until ovulation was detected again. At 5 days after ovulation, fragments of concepts from day 13, which had previously been collected, were infused into the uterus of each mare. Uterine fluid and endometrial biopsies were collected on day 7 post-ovulation, composing the Fragment group (n = 10). The mares were examined daily by Power Doppler ultrasonography and Spectral Doppler from ovulation to day 7, in both cycles. Biopsies were divided and stored in 2.5% glutaraldehyde solution for scanning electron microscopy and 4% buffered paraformaldehyde solution for histological studies. Uterine fluid was subjected to 2D-PAGE electrophoresis, generating gels that were analyzed and compared. Spots with differences (P <0.01) were removed, trypsinized, lyophilized and subjected to mass spectrometry (LC-MS/MS and MALDI-TOF / TOF) and identification. A decrease in the percentage of ciliated and flattened cells was observed in Fragment group in relation to the Cyclic group. Nevertheless, protruded cells, superficial and intraglandular secretion, glandular lumen and diameter, blood vessel diameter, endometrial vascularization and immune cells were higher in Fragment group than in Cyclic group. Changes in uterine fluid protein abundance were identified by 2D-PAGE. 13 proteins were identified by mass spectrometry: Albumin, Apolipoprotein A1, Complement Factor B, Fibrinogen B, Fibrinogen G, Hemopexin, IGL, IGHC1, IGHCp, Lipocalin 2, Serpinb1 and Serotransferrin, Like-Serotransferrin. Histological and protein changes and their interactions suggest new findings for a better understanding of maternal-embryonic communication.