Nanoemulsões de uso tópico contendo extrato de achyrocline satureioides : estudos de formulação, permeação e atividade anti-herpética

Abstract

Achyrocline satureioides (AS) - Asteraceae, conhecida como marcela, é uma planta medicinal amplamente utilizada na América do Sul. Estudos recentes demonstraram a atividade anti-herpética dos extratos hidroalcoólicos de AS. Tal atividade tem sido relacionada à presença de constituintes flavonoídicos (i.e. quercetina, luteolina e 3-O- metilquercetina) nesses extratos. Neste contexto, o objetivo do presente estudo foi desenvolver nanoemulsões de uso tópico contendo o extrato de AS visando o tratamento do herpes simples. Em uma primeira etapa, o extrato hidroetanólico líquido ou seco (aspersão ou liofilização) de AS foi incorporado em nanoemulsões constituídas de um núcleo oleoso de triglicerídeos de cadeia média estabilizado por lecitina de gema de ovo e polissorbato 80. As nanoemulsões foram obtidas por emulsificação espontânea. As formulações foram adicionalmente caracterizadas por medidas de tamanho, potencial zeta, viscosidade e morfologia. A incorporação dos flavonoides nas nanoemulsões foi total e mostrou-se estável por quatro meses. A liberação da 3-O-metilquercetina a partir das formulações contendo extratos ocorreu dentro de 8 horas seguindo uma cinética de 1ª ordem, utilizando células de difusão de Franz. Quando a membrana utilizada foi pele de orelha suína, não foram detectados flavonoides no fluido receptor. Os flavonoides foram detectados nas camadas da pele, especialmente quando essa foi lesionada, o que foi confirmado por microscopia confocal usando Vermelho do Nilo como marcador fluorescente. A utilização de mucosa esofágica como membrana conduziu a uma maior retenção dos flavonóides em comparação à pele, e a remoção da camada superficial permitiu a permeação dos flavonóides. A determinação dos flavonoides tanto nas formulações como na pele e mucosa suína foi realizada por cromatografia líquida em condições analíticas validadas ao longo do estudo. A avaliação da atividade anti-herpética in vitro frente ao HSV (tipo 1) demonstrou que a incorporação de extrato de AS em nanoemulsões conduz à redução da concentração inibitória 50% e ao aumento do índice de seletividade. O conjunto dos resultados demonstra que nanoemulsões são potenciais carreadores de uso tópico para o extrato de AS.

Achyrocline satureioides (AS) - Asteraceae, known as marcela, is a medicinal plant widely used in South America. Recent studies have demonstrated the antiherpetic activity of hydroalcoholic extracts of AS. Such activity has been related to the presence of flavonoids (i.e. quercetin, luteolin, and 3-O-methylquercetin) in these extracts. In this context, the objective of this study was to develop topical nanoemulsions containing extract of AS intended for the treatment of herpes simples. First, the liquid or dry (spray- or freeze-dried) hydroethanolic extract was incorporated in nanoemulsions, composed of an oil core of medium chain triglycerides stabilized by egg-lecithin and polysorbate 80. The extracts were incorporated during the preparation of the nanoemulsion by spontaneous emulsification. The formulations were further characterized by evaluating size, zeta potential, viscosity, and morphology. The incorporation of the flavonoids in the nanoemulsions was total and the formulation was stable for four months. The release of 3-O-methylquercetin from nanoemulsions containing extracts occurred within 8 hours following 1st-order kinetics, using the Franz diffusion cells. When the membrane used was pig ear skin, flavonoids were not detected in the receptor fluid. The flavonoids were detected in the skin layers, especially when this was injured, which was confirmed by confocal microscopy using Nile Red as a fluorescent marker. The use of esophageal mucosa as membrane led to greater retention of flavonoids in comparison to skin, and the removal the superficial layer of epithelium allowed the permeation of the flavonoids.The determination of the flavonoids in the formulations and the pig ear skin layers was assayed by liquid chromatography in analytical conditions validated throughout the study. The evaluation of the in vitro antiherpetic activity over HSV (Type 1) demonstrated that the incorporation of AS extract into nanoemulsions led to a reduction of the inhibitory concentration and an increase in the selectivity index. The overall results show that nanoemulsions are potential carriers for the topical use of AS extract.