Protocolo para remoção do crioprotetor do sêmen criopreservado de Rhamdia quelen
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Data
2021Autor
Orientador
Nível acadêmico
Mestrado
Tipo
Outro título
Protocol to remove the crioprotector from the cryopreserved milt from Rhamdia quelen
Assunto
Resumo
A criopreservação oferece vários benefícios, entre estes o armazenamento de espermatozoides a longo prazo. No entanto, a falta de padronização ou a redução da qualidade espermática após o congelamento-descongelamento são desafios que ainda precisam ser resolvidos. O uso de tecnologias de reprodução assistida, como a centrifugação, tem sido relatada como uma ferramenta que permite separar a melhor porção de espermatozoides do sêmen criopreservado. O objetivo da pesquisa foi desenvolver um método ...
A criopreservação oferece vários benefícios, entre estes o armazenamento de espermatozoides a longo prazo. No entanto, a falta de padronização ou a redução da qualidade espermática após o congelamento-descongelamento são desafios que ainda precisam ser resolvidos. O uso de tecnologias de reprodução assistida, como a centrifugação, tem sido relatada como uma ferramenta que permite separar a melhor porção de espermatozoides do sêmen criopreservado. O objetivo da pesquisa foi desenvolver um método de centrifugação para sêmen criopreservado de Rhamdia quelen e sua influência sobre a funcionalidade e capacidade de fecundação dos espermatozoides separados por gradiente de densidades AllGrad® 90%. Para isto foram realizados dois estudos. O primeiro estudo teve como objetivo a padronização de um método de centrifugação por gradiente de densidades para a separação do sêmen criopreservado de R. quelen a través do gradiente AllGrad® 90%. Seguidamente o método foi validado por meio de análises de qualidade (concentração, motilidade e morfologia espermática). Ao final deste estudo, a centrifugação de 1000 x g por 10 min, permitiu obter em média 8,19 x 106 espermatozoides normais/mL (22,25 ± 4,64%). Este valor representa um aumento de 9,25% dos espermatozoides normais em comparação ao sêmen criopreservado não centrifugado (P = 0,0013). Esse resultado deu lugar a um segundo estudo, cujo objetivo foi validar a eficiência da técnica de centrifugação por gradiente de densidades sobre a funcionalidade espermática e capacidade de fertilização. Foram comparados três tratamentos: i) controle (sêmen descongelado não centrifugado), ii) a centrifugação diferencial ou peletização e, iii) centrifugação por gradiente de densidades com AllGrad® 90%. A centrifugação diferencial resultou em melhores taxas de motilidade (42,58 ± 6,05%). Tanto a centrifugação diferencial quanto por gradiente de densidades resultou em melhores índices de atividade mitocondrial (1,58 ± 0,79 e 2,02 ± 1,88 AU/100 milhões sptz, respectivamente), taxa de fertilização (76,68 ± 15,22% e 69,85 ± 17,85%, respectivamente) e de eclosão (54,62 ± 17,39% e 50,87 ± 20,59%, respectivamente). Portanto, os métodos de centrifugação aplicados pela primeira vez no sêmen criopreservado de R. quelen, mostraram ser eficientes para obter uma melhor fração de espermatozoides. ...
Abstract
Cryopreservation offers several benefits, including long-term storage of sperm. However, the lack of standardization or the reduction of sperm quality after freezing-thawing are challenges that still need to be solved. The use of assisted reproduction technologies, such as centrifugation, has been reported as a tool that allows the best portion of sperm to be separated from cryopreserved milt. The objective of the research was to develop a centrifugation method for cryopreserved milt from Rhamd ...
Cryopreservation offers several benefits, including long-term storage of sperm. However, the lack of standardization or the reduction of sperm quality after freezing-thawing are challenges that still need to be solved. The use of assisted reproduction technologies, such as centrifugation, has been reported as a tool that allows the best portion of sperm to be separated from cryopreserved milt. The objective of the research was to develop a centrifugation method for cryopreserved milt from Rhamdia quelen and its influence on the functionality and fertilization capacity of spermatozoa separated by 90% AllGrad® density gradient. For this, two studies were carried out. The first study aimed to standardize a density gradient centrifugation method for the separation of R. quelen cryopreserved milt through the AllGrad® 90% gradient. Then the method was validated through quality analysis (concentration, motility and sperm morphology). At the end of this study, the centrifugation of 1000 x g for 10 min, allowed an average of 8.19 x 106 normal sperm/mL to be obtained (22.25 ± 4.64%). This value represents a 9.25% increase in normal sperm compared to non-centrifuged cryopreserved milt (P = 0.0013). This result gave rise to a second study, whose aim was to validate the efficiency of the density gradient centrifugation technique on sperm functionality and fertilization capacity. Three treatments were compared: i) control (non-centrifuged thawed semen), ii) differential centrifugation or pelletization, and iii) density gradient centrifugation with AllGrad® 90%. Differential centrifugation resulted in better motility rates (42.58 ± 6.05%). Both differential centrifugation and density gradient resulted in better rates of mitochondrial activity (1.58 ± 0.79 and 2.02 ± 1.88 AU/100 million sptz, respectively), fertilization rate (76.68 ± 15.22% and 69.85 ± 17.85%, respectively) and hatching (54.62 ± 17.39% and 50.87 ± 20.59%, respectively). Therefore, the centrifugation methods applied for the first time in the cryopreserved milt of R. quelen, proved to be efficient to obtain a better fraction of sperm. ...
Instituição
Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Faculdade de Agronomia. Programa de Pós-Graduação em Zootecnia.
Coleções
-
Ciências Agrárias (3250)Zootecnia (672)
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