Estudo químico e avaliação dos efeitos de Baccharis trimera na proliferação e morte de células de glioblastoma

Abstract

Glioblastomas são tumores primários do sistema nervoso central, altamente invasivos e resistentes à quimioterapia. Portanto, são necessários mais esforços para levar ao desenvolvimento racional de novas terapias. Baccharis trimera (Less.) DC. (Asteraceae), conhecida no Brasil como "carqueja", é amplamente utilizada na medicina popular e tem como constituintes alguns flavonóides. É relatado que compostos fenólicos como a quercetina exercem atividade antiproliferativa e indutora de apoptose em células de glioma. O objetivo deste trabalho foi a busca de compostos ativos de B. trimera contra células de glioma e a elucidação de seu mecanismo de ação. A partir das partes aéreas de B. trimera foram obtidos um extrato bruto hidroetanólico, uma fração de compostos fenólicos e uma fração de terpenos. As frações foram quimicamente caracterizadas por cromatografia. As células da linhagem C6 de glioma de rato foram incubadas com as amostras de B. trimera nas concentrações de 100 a 1.000 μg/mL. Após 24 e 48 horas de incubação, as células tratadas com as amostras e os controles foram submetidas aos ensaios com MTT e SRB. As amostras (extrato bruto hidroetanólico, fração enriquecida de terpenos e fração enriquecida de compostos fenólicos) apresentaram uma inibição da viabilidade celular concentração e tempo dependente. O ensaio de MTT, após 24 horas, demonstrou que as amostras de B. trimera inibiram a viabilidade celular em 50% nas concentrações entre 113 e 796 μg/mL. As frações mais ativas na concentração inibitória 50 (IC50, 24 h) foram investigadas para avaliar os mecanismos de morte celular e os efeitos sobre o ciclo celular. O tratamento com as frações não alterou o ciclo celular. O resultado de células C6 tratadas com a fração enriquecida de compostos fenólicos na IC50 coradas com iodeto de propídio (IP) não foi significativo (8,06%), enquanto que por meio da coloração com anexina V, foi significativo em 30,7% de células. Esses resultados são relevantes para futuras avaliações de vias de sinalização envolvidas na apoptose de linhagem de células C6 tratadas com a fração enriquecida de compostos fenólicos de B. trimera. Também a redução da viabilidade de células C6 causada pelo tratamento com a fração enriquecida de terpenos requer uma investigação mais aprofundada do mecanismo de morte celular envolvido.

Glioblastoma are primary tumors of the central nervous system, highly invasive and resistant to chemotherapy. Therefore, more efforts are needed to lead to a rational development of new therapies. Baccharis trimera (Less.) DC. (Asteraceae), known in Brazil as “carqueja”, is widely used in folk medicine, having as constituents some flavonoids. It is reported that compounds like quercetin exert antiproliferative and apoptosis-inducing activity in glioma cells. The aim of this work was to search for active compounds from B. trimera against glioma cells and the elucidation of their mechanism of action. From the aerial parts of B. trimera were obtained a crude hydroethanolic extract, a fraction of phenolic compounds and a fraction of terpenes. The fractions were chemically characterized by chromatography. The glioma C6 cell line was incubated with the samples of B. trimera at 100 to 1.000 μg/mL. After 24 and 48 hours of incubation, cells treated with samples and controls were submitted to MTT and SRB assays. Samples showed an inhibition of cell viability concentration and time dependent. The MTT assay after 24 hours showed that the samples of B. trimera inhibited cell viability by 50% at concentrations between 113 and 796 μg/mL. The most active fractions at the IC50 (24 h) were investigated for evaluate mechanisms of cell death and effects on cell cycle. The treatment with fractions didn’t alter the cell cycle. The result of C6 cells treated with the IC50 phenolic enriched fraction stained with IP was not significant (8.06%), while staining with annexin V, was significant to 30.7% of cells. These results are relevant for future evaluations of signaling pathways involved in apoptosis of C6 cell line treated with B. trimera phenolic fraction. Also, the reduction of C6 cell viability caused by treatment with the terpene enriched fraction requires further investigation of the cell death mechanism involved.