Cultura de tecido ovariano : padronização e análise histológica

Abstract

Introdução: A utilização de agentes quimioterápicos citotóxicos no tratamento de diversas doenças, com potencial de desenvolvimento de insuficiência ovariana precoce e consequente infertilidade, exige que técnicas de preservação ovariana sejam estudadas e constantemente aprimoradas. Para isso, a padronização da cultura de tecido ovariano é importante e deve estar bem estabelecida. Os pacientes transgêneros masculinos submetidos à cirurgia de redesignação de sexo oportunizam a possibilidade de estudo deste órgão nobre em pesquisa. Objetivo: Descrever as características histológicas do tecido ovariano humano submetido a cultura in vitro a partir de ovários dos pacientes transgêneros masculinos. Método: Estudo experimental in vitro. As amostras foram coletadas durante cirurgia de redesignação de sexo dos pacientes transgêneros masculinos. O córtex ovariano foi cortado em fragmentos de 2, 3 e 4 mm e dispostos em placa de 96 poços próprias para cultivo por 2, 4, 6 e 8 dias e lâminas destes fragmentos foram confeccionadas, coradas em HE e analisadas por patologista experiente. Resultados: A histologia dos fragmentos ovarianos foi analisada nos tempos zero, 2, 4, 6 ou 8 dias de cultura, sendo observada hiperplasia estromal em todas as amostras. A presença de hiperplasia estromal não está associada com a obtenção de folículos primordiais ou primários. A hipocelularidade periférica foi outro achado recorrente. Folículos primordiais e primários foram identificados com padrão heterogêneo entre os fragmentos de um mesmo paciente e entre pacientes diferentes, sendo que folículos em estágios mais avançados de desenvolvimento (secundários e antrais) não foram encontrados. Houve associação entre o diâmetro dos 14 fragmentos ovarianos e a identificação de folículos primários (p=0,036). O número de dias em cultura apresentou associação com sinais histológicos de sofrimento tecidual nos fragmentos (p=0,002). O número total de folículos identificados nas amostras de 2 mm de diâmetro foi significativamente menor do que nas amostras de 4 mm (p=0,031). Conclusão: Os ovários destes pacientes, mesmo após exposição prolongada a testosterona, apresentavam folículos primordiais e primários viáveis, mantendo a viabilidade com o passar dos dias expostos à cultura. A obtenção de folículos em estágios mais avançados de desenvolvimento não foi identificada no tempo basal, nem após 8 dias de cultura.

Background: The use of cytotoxic chemotherapeutic agents in the treatment of various diseases, with the potential to develop early ovarian insufficiency and consequent infertility, requires that techniques of ovarian preservation to be studied and constantly improved. For this, the standardization of ovarian tissue’s culture is important and must be well established. Transgender male patients undergoing sex reassignment surgery provide the opportunity to study this noble organ in research. Aim: To describe the histological characteristics of human ovarian tissue subjected to in vitro culture from the ovaries of male transgender patients. Method: In vitro experimental study. The samples were collected during sex reassignment surgery for male transgender patients. The ovarian cortex was cut into fragments of 2, 3 and 4 mm and placed in a 96-well plate for 2, 4, 6 and 8 days, slides of these fragments were made, stained in HE and analyzed by an experienced pathologist. Results: The histology of the ovarian fragments was analyzed at time zero, 2, 4, 6 or 8 days of culture, with stromal hyperplasia being observed in all samples. Stromal hyperplasia was observed in all samples. Presence of stromal hyperplasia wasn’t associated with obtaining primordial or primary follicles. Peripheral hypocellularity was another recurrent finding. Primordial and primary follicles were identified with a heterogeneous pattern between fragments from the same patient and between different patients, and follicles in more advanced stages of development (secondary and antral) were not found. There was an association between the diameter of the ovarian fragments and the identification of primary follicles (p=0.036). The number of days in culture was associated with histological signs of tissue suffering in the fragments (p=0.002). The total number of follicles identified in the 2 mm diameter samples was significantly lower than in the 4 mm diameter samples (p=0.031). Conclusion: The ovaries of these patients, even after prolonged exposure to testosterone, presented viable primordial and primary follicles, maintaining viability over the days exposed to the culture. Obtaining follicles at more advanced stages of development was not identified at baseline, nor after 8 days of culture.