Ligação dos fatores de crescimento semelhantes à insulina durante a diferenciação das células de carcinoma embrionário humano extragonadal (mediastinal) Tera-2

Abstract

As células de carcinoma embrionário humano Tera-2 sofrem diferenciação quando expostas à 2.1 mM alfa-difluorometilornitina (DFMO). As células diferenciadas ligam 2-3 vezes mais [125I] - IGF-II do que as células não-diferenciadas. A ligação de IGF-II foi consideravelmente maior do que de IGF-I tanto em células Tera-2 diferenciadas quanto não-diferenciadas. Análise de ligação competitiva demonstrou que a ligação de [125I] - IGF-II foi efetivamente bloqueada por IGF-II não-marcado, mas não por IGF-I não-marcado, enquanto que a ligação de t125I] - IGF-I foi bloqueada tanto por IGF-I como por IGF-II não-marcados. As células Tera-2 indiferenciadas exibem um modelo de sítio único de ligação tanto para IGF-I (Kd = 1.2 InM, 7.0 x 103 sítios/célula) quanto para IGF-II (Kd = 8.2 ZnM, 3.4 x 105 sítios/célula). As células Tera-2 diferenciadas exibem um modelo de sítio único de ligação para IGF-I (Kd = 1.03nM, 6.7 x 103 sitios/celula) e um modelo de dois sítios de ligação para IGF-II. Células Tera-2 diferenciadas exibem um sítio de ligação de alta afinidade-baixa capacidade (Kdh = 0.31nM, 2.2 x 105 sítios/célula) e um sítio de ligação de baixa afinidade-alta capacidade (Kdh = IS.lnM, 1.6 x IO7 sítios/célula) para IGF-II. Em experimentos de reação de afinidade cruzada [125I] - IGF-I ligou-se quase que exclusivamente ao receptor do tipo I (bandas de 130 kDa e 260 kDa), enquanto que f123!] - IGF-II ligou-se ao receptor tipo II (banda de 250 kDa) ou a uma variedade de proteínas de ligação com baixos pesos moleculares (bandas de 43 kDa, 70 kDa, 95 kDa e 130 kDa). IGF-II nâo-marcada preveniu reaçao cruzada de [123I] - IGF-II a todas as proteínas de ligação, porém, o mesmo não A aconteceu com IGF-I, sugerindo a presença de proteínas de ligação específica para IGF-II. O número aumentado de sítios de ligação específicos para IGF-II observado após diferenciação induzida por DFMO em células de carcinoma embrionário humano Tera-2 ocorreu nos sítios de ligação de baixa afinidade. Esta mudança quantitativa pode representar um aumento no numero das proteínas de ligação específicas para IGF-II. Uma diminuição significativa nos efeitos estimulatórios de IGF-II na captação de timidina-[3H] foi observado após diferenciação induzida por DFMO em células de carcinoma embrionário humano Tera-2. Estes efeitos podem ser explicados pelo número aumentado de proteínas de ligação observado após a diferenciação, que especificamente ligam-se à IGF-II, podendo funcionar como um "sink" fisiológico para o hormônio, diminuindo sua interação com o receptor efetivo para IGF tipo II efetivo.

Tera-2 human embryonal carcinoma cells undergo differentiation when exposed to 2-lnM alpha-difluoromethilornithine. Differentiated Tera-2 cells bound 2-3 fold more [125I] - IGFII than undifferentiated cells. The binding of IGF-II was considerably greater than IGFT in both undifferentiated and differentiated Tera-2 cells. Competitive binding analysis demonstrated that [^1] - IGF-II binding was effectively blocked by unlabeled IGF-II but not by unlabeled IGFT, while [^2^1] - IGFT binding was blocked by either unlabeled IGFT or unlabeled IGF-II. Undifferentiated Tera-2 cells exhibited a single-site binding model for either IGF-I (Kd = 1.2 InM, 7.0 x 103 sites/cell) or IGF-II (Kd = 8.27nM, 3.4 x 105 sites/cell). Differentiated Tera-2 cells exhibited a one-site binding model for IGF-I (Kd = 1.03nM, 6.7 x 103 sites/cell) and a two-site binding model for IGF-II. Differentiated Tera-2 cells exhibited a high affinity-low capacity binding site (Kdh = 0.31nM, 2.2 x 103 sites/cell) and a low affinity-high capacity binding site (Kdh = IS.lnM, 1.6 x IO7 sites/cell) for IGF-II. In affinity cross-linking experiments [^23I] - IGF-I bound almost exclusively to the type I receptor (130 kDa and 260 kDa bands), whereas [^2^I] - IGF-II bound eother to the type II receptor (250 kDa band) or to a variçty of binding proteins with lower molecular weights (43 kDa, 70 kDa, 95 kDa and 130 kDa bands). Unlabeled IGF-II but not unlabeled IGFT prevent cross-linking of [123I] - IGF-II to ali the binding proteins suggesting the presence of IGF-II specífic binding proteins. The observed increased number of specific binding sites for IGF-II following DFMOinduced differentiation of Tera-2 human embryonal carcinoma cells occurred in the low affinity binding sites. This quantitative change might represent an increase in the number of specific IGF-II binding proteins. A sígnificant decrease in the stimulatory effects of IGF-II on the [^HJ-thymidine uptake was observed after DFMO-induced dlfferentiation of Tera-2 human embryonal carcinoma cells. These effects could be explained by the increased number of binding proteins observed after differentiation, which specifically binding IGF-II might function as a physiological "sink" for the hormone, decreasing its interaction with the effective type II IGF receptor.