Otimização da imunofluorescência direta para diagnóstico de raiva

Abstract

O diagnóstico laboratorial da raiva utiliza uma metodologia padronizada, baseada essencialmente no método de imunofluorescência direta, ou “direct fluorescent antibody test” (DFAT). No presente estudo foram reavaliadas algumas variáveis do DFAT, incluindo a duração do tempo de fixação das lâminas com impressões de tecido nervoso, duração das incubações de pré-adsorção do conjugado com as suspensões de tecido nervoso de camundongos infectados (IMB) ou não infectados (NMB) e a duração do período de incubação destas misturas sobre as lâminas com as impressões fixadas. A combinação que proporcionou maior eficácia à DFAT foi obtida com a fixação das lâminas com impressões de tecido nervoso em acetona a -20 oC por 30 minutos, pré-adsorção do conjugado com suspensões de NMB e IMB por 60 minutos a 37oC e subseqüente incubação dessas misturas sobre as impressões por 2 horas a 37oC. Estas alterações permitiram a obtenção de uma fluorescência de intensidade sensivelmente maior que a obtida com a metodologia padrão recomendada, aliada a uma completa inibição da fluorescência sobre os controles.

Rabies diagnosis follows a standardized methodology, where the direct fluorescent antibody test (DFAT) plays an essential role. Optimization of DFAT procedures may improve sensitivity and specificity of the test. In the present study, some of the variables of DFAT were reassessed, such as the duration of acetone fixation of brain impressions on slides, incubation of the pre-adsorbing mixtures of conjugate and infected (IMB) and uninfected mouse brain suspensions (NMB), as well as the length of incubation of the pre-adsorbing mixtures on fixed brain impressions. The combination that provided the greatest efficacy at DFAT was attained when slides were fixed for 30 minutes in acetone at -20 oC, the pre-adsorbing conjugate and NMB/ IMB suspensions were incubated for 60 minutes at 37 oC and subsequently layered onto impressions for 2 hours at 37oC. These modifications provided a more intense fluorescent reaction, together with a complete inhibition of fluorescence on the control impressions, when compared to the standard recommended procedure.