Mapeamento do sítio de produção do microRNA-423-5P em modelo animal de remodelamento cardíaco após insulto isquêmico

Abstract

O objetivo desta tese é avaliar a expressão do miRNA-423-5p, em diferentes sítios, em modelo experimental de remodelamento cardíaco após insulto isquêmico em ratos. Os animais foram randomizados em grupos SHAM (cirurgia sem oclusão da artéria coronária descendente anterior esquerda) ou IAM (cirurgia com ligadura da artéria coronária descendente anterior esquerda) e acompanhados por 1, 7, 28 e 90 dias. Após o tempo de seguimento, os animais foram submetidos ao ecocardiograma e eutanasiados. Foi retirado sangue do plexo retroorbital, sangue venoso e arterial e coletado tecido do músculo gastrocnêmio e do ventrículo esquerdo separando as áreas remota (REM), infartada (INF) e peri-infartada (PERI). A partir da homogeneização dos tecidos, foi realizada a extração de miRNA e sua expressão quantificada pelo método de PCR em tempo real. Também foi mensurado os níveis plasmáticos do peptídeo natriurético cerebral (BNP). Os dados foram analisados pela teste de ANOVA de uma e duas vias e correlações através do programa estatístico SPSS 21.0. Quanto a caracterização do modelo utilizado, podemos verificar que a fração de ejeção do ventrículo esquerdo dos ratos IAM foram menores que os do grupo SHAM e os percentuais de área acinética foram iguais em todos os grupos IAM, como esperado. Também observamos que o miRNA-423-5p é expresso no coração, nos diferentes segmentos analisados, apresentando variação significativa nos tempos avaliados, correlacionado-se positivamente com o tamanho do infarto e negativamente com a fração de ejeção do ventrículo esquerdo. Diante deste cenário, nossos achados solidificam o conceito de que a expressão do miRNA-423-p se altera ao longo do tempo após insulto isquêmico e pode ter papel relevante no remodelamento cardíaco de origem isquêmica.

The objective of this project was to evaluate the expression of miRNA-423-5p in an experimental model of cardiac remodeling after ischemic injury in rats. Animals were randomized to SHAM group (surgery without occlusion of the left anterior descending coronary artery) or acute myocardial infaction (AMI) group (surgery with ligation of the left anterior descending coronary artery) and followed for 1, 7, 28 and 90 days. After the follow-up period, the animals were submitted to echocardiography and euthanized. Blood from the retroorbital plexus, venous and arterial blood was collected; and gastrocnemius and left ventricle tissue was collected, separating the remote (REM), infarcted (INF) and peri-infarcted (PERI) areas. From the homogenization of tissues, miRNA was extracted and its expression quantified by real-time PCR. Plasma levels of brain natriuretic peptide (BNP) were also measured by ELISA. Data were analyzed by one-way and two-way ANOVA and coefficient correlations were calculated using the statistical package SPSS 21.0. Regarding the experimental model, we could verify that the left ventricular ejection fraction of the AMI rats were reduced compared to the SHAM group and the percentages of akinetic area were the same in all AMI groups, as expected. We also observed that miRNA-423-5p is expressed in the heart in the different segments analyzed, showing significant variation in the different periodos that were evaluated, is positively correlated with infarct size and negatively with left ventricular ejection fraction. In this scenario, our findings solidify the concept that miRNA-423-p expression changes over time after an ischemic insult and may play a relevant role in the cardiac remodeling of ischemic origin.