Padronização de técnicas bioquímicas para avaliação de concentrado de plaquetas canino

Abstract

A hemoterapia veterinária tem evoluído muito nos últimos anos, sempre seguindo os padrões de hemoterapia humana. Ao mesmo tempo em que a transfusão de concentrado de plaquetas tem sido cada vez mais requisitada em medicina veterinária ainda são escassas as pesquisas com alvo no concentrado de plaquetas canino. Este trabalho apresenta uma revisão da literatura sobre os aspectos estruturais e funcionais das plaquetas, indicações do uso de concentrado de plaquetas em cães, métodos de preparo e características desejadas em um concentrado de plaquetas; além de uma revisão sobre metabolismo, lesões plaquetárias de armazenamento e o uso da citometria de fluxo para avaliação de plaquetas. O presente estudo teve como objetivo padronizar técnicas de avaliação do concentrado de plaquetas canino relatando as mudanças observadas durante 5 dias de armazenamento. Para tal, foram avaliados aspectos de morfologia, ativação, função, metabolismo e indicadores de lesão mitocondrial e morte celular em CP canino através de técnicas de agregação plaquetária, bioquímica celular e citometria de fluxo durante o armazenamento. Foram utilizadas 22 bolsas de CP canino, avaliadas nos dias 1, 3 e 5 após a coleta. Todas as bolsas apresentaram-se negativas quanto ao isolamento de micro-organismos. Houve diminuição significativa da concentração de glicose, pCO2, bicarbonato, ATP, pH e swirling; aumento da concentração de lactato e da pO2; poucos sinais de ativação plaquetária; e diminuição do potencial de membrana mitocondrial no final do período estudado. Não foram observadas mudanças nos testes de exposição de fosfatidilserina e caspase durante o período avaliado. As sondas MitoTracker Green e MitoTracker Red podem ser utilizadas na avalição de lesão mitocondrial de plaquetas com resultados fidedignos. Foram padronizadas técnicas que não foram descritas na avaliação de plaquetas caninas, e que poderão ser utilizadas em outros estudos sobre o tema. Com este trabalho, é possível ter dados concretos a respeito das alterações metabólicas ocorridas ao longo do período de armazenamento. Estes dados servem como base para outros estudos in vitro e in vivo relacionados ao uso de concentrado de plaquetas. Espera-se gerar conhecimento e motivar mais pesquisas nas áreas de hematologia e hemoterapia veterinária.

Veterinary hemotherapy has evolved in the last years, following standards of human blood therapy. While the transfusion of platelet concentrate has been increasingly requested in veterinary medicine are insufficient studies on concentrate of canine platelets. This paper presents a review about structural and functional aspects of platelets, indications for the use of platelet concentrates in dogs, preparation methods and characteristics desired in a platelet concentrate; metabolism, platelet storage lesion and the use of flow cytometry to evaluate platelets. This study aimed to standardize canine platelet concentrate techniques reporting observed changes in 5 days of storage. For this purpose, were evaluated morphology, activation, function, metabolism, indicators of mitochondrial damage and cell death through the use of platelet aggregation techniques, biochemistry and cell flow cytometry. We evaluate standard techniques no earlier used in the evaluation of canine platelets, which can be used in other studies on the subject. For this, 22 canine platelet concentrates were evaluated on days 1, 3 and 5 after collection. All samples were negative for contamination. There was observed a significant decrease in glucose concentration, pCO2, bicarbonate, ATP, pH and swirling; enchance lactate and pO2 concentrations; few platelet activation signals; and decreased mitochondrial membrane potential in the end of the study period. There were no changes in phosphatidylserine and caspase exposure tests during the study period. The results reveal the the MitoTracker Green and MitoTracker Red dyes can be used in evaluation of platelets mitochondrial injury with reliable results. With this work, it was possible to have concrete information about the metabolic changes in canine platelet concentrate during the storage period. These data serve as a basis for other in vitro and in vivo studies regarding the use of canine platelet concentrate. The expectation of this research was to generate knowledge and encourage more research in hematology and veterinary hemotherapy.