Avaliação do efeito da acupuntura manual sobre convulsões induzidas por pentilenotetrazol no modelo de kindling em camundongos

Abstract

Cerca de 30% dos pacientes com epilepsia continuam refratários ao tratamento medicamentoso e continuam a sofrer crises, mesmo utilizando um ou mais fármacos antiepilépticas. Intervenções não farmacológicas representam uma alternativa aos fármacos antiepilépticos, dentre as quais a acupuntura, uma técnica tradicional chinesa, que é freqüentemente utilizada como tratamento complementar na medicina ocidental. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da acupuntura manual sobre as convulsões no modelo de kindling induzido por pentilenotetrazol (PTZ) em camundongos, comparar o efeito da acupuntura com diazepam, avaliar a sua utilização em associação a uma dose baixa de diazepam, e avaliar parâmetros de estresse oxidativo, inflamação, genotoxicidade e mutagenicidade. No modelo de kindling, os animais dos grupos que receberam acupuntura manual, foram tratados diariamente durante 16 dias com estimulação no acuponto VG20, e a cada três dias os animais receberam o salina ou diazepam (0,15 mg / kg; i.p.) 30 min antes da administração de PTZ (60 mg / kg; s.c.). Nos grupos que não receberam acupuntura manual, os animais receberam salina, diazepam (2 mg / kg; i.p. - controle positivo), diazepam (0,15 mg / kg; i.p.), 30 min antes da administração de PTZ (60 mg / kg; s.c.). O comportamento convulsivo (porcentagem de convulsão e latência para a primeira convulsão) foi observado por 30 min. Após o último tratamento, os animais foram eutanasiados e o córtex, hipocampo, sangue periférico e medula óssea foram coletados para avaliação dos parâmetros de estresse oxidativo, inflamação, genotoxicidade e mutagenicidade. Os dados de porcentagem (%) de convulsão e latência para a primeira convulsão (LFS) foram analisados pelo Teste de Fisher e GEE respectivamente. MAC e MAC + DZP 0.15mg/Kg não impediram a ocorrência das convulsões, nem aumentaram a LFS, com exceção do terceiro dia de tratamento, no qual observou-se aumento na LFS no grupo MAC + DZP 0.15mg/Kg, comportamento que não se repetiu ao longo do protocolo. Observou-se nos grupos MAC e MAC + DZP 0.15mg/Kg uma redução na formação de espécies reativas de oxigênio e na liberação de óxido nítrico, bem como aumento na atividade de SOD e CAT, sugerindo que a acupuntura oferece proteção contra estresse oxidativo. Além disso, nos mesmos grupos verificou-se a redução na expressão da citocina pró-inflamatória (TNF-α). No grupo MAC + DZP 0.15mg/Kg observou-se uma tendência à proteção do DNA no hipocampo, uma vez que não houve diferença em comparação ao grupo Sal/Sal, contudo não foi observada mutagenicidade em nenhum dos grupos de tratamento. Para concluir, os resultados indicaram que MAC em associação ao DZP 0.15mg/Kg foi capaz de alterar parâmetros associados a convulsões mediada por PTZ no modelo de kindling em camundongos, bem como a acupuntura teve um efeito protetor contra estresse oxidativo, neuroinflamação e danos ao DNA no mesmo modelo.

Around 30% of patients with epilepsy continue refractory to drug treatment and continue to suffer crises, even using one or more anti-epileptic drugs. Nonpharmacological interventions represent an alternative to antiepileptic drugs, among which acupuncture, a traditional Chinese technique, which is often used as a complementary treatment in Western medicine. The aim of this study was to evaluate the effect of manual acupuncture on seizures in the kindling model induced by pentylenetetrazol (PTZ) in mice, comparing the effect of acupuncture with diazepam, to evaluate their use in combination with a low dose of diazepam, and evaluate parameters of oxidative stress, inflammation, genotoxicity and mutagenicity. In the model of kindling, the animal groups receiving manual acupuncture, were treated daily for 16 days with stimulation of the acupoint VG20, and every three days the animals received saline or diazepam (0.15 mg / kg, ip) 30 min before PTZ administration (60 mg / kg, sc). In the groups not receiving manual acupuncture, the animals received saline, diazepam (2 mg / kg, ip - positive control), diazepam (0.15 mg / kg, ip) 30 min before the PTZ administration (60 mg / kg ; sc). The convulsive behavior (percentage of seizure and latency to the first seizure) was observed for 30 min. After the last treatment, the animals were euthanized and the cortex, hippocampus, peripheral blood and bone marrow were collected for evaluation of parameters of oxidative stress, inflammation, genotoxicity and mutagenicity. Percentage of seizure (%) and latency to the first seizure (LFS) were analyzed by Fisher test and GEE respectively. MAC and MAC + DZP 0.15mg / kg did not prevent the occurrence of seizures or increased LFS, except for the third day of treatment, in which there was an increase in LFS in the MAC + DZP 0.15mg / kg group, behavior that was not repeated throughout the protocol. It was observed in the MAC and MAC + DZP 0.15mg / kg groups a reduction in the formation of reactive oxygen species and release of nitric oxide and increase in SOD and CAT activity, suggesting that acupuncture provides protection against oxidative stress. Furthermore, in the same groups there was a reduction in the expression of pro-inflammatory cytokine (TNF-α). In the MAC + DZP 0.15mg / kg group there was a tendency to protect DNA in hippocampus since there was no difference in comparison to Sal/Sal group, however mutagenicity was not observed in any of the treatment groups. In conclusion, the results indicated that MAC in association with DZP 0.15mg / kg was able to change parameters associated with seizures mediated in PTZ kindling model in mice, also suggested that acupuncture had a protective effect against oxidative stress, neuroinflammation and damage DNA in the same model.