Perfil molecular e de suscetibilidade a claritromicina do complexo Mycobacterium abscessus

Abstract

Claritromicina era considerada um antibiótico de escolha para infecções causadas pelo complexo Mycobacterium abscessus, entretando, recentemente falhas no tratamento com este antibiótico têm sido reportadas. A resistência adquirida a claritromicina está relacionada à mutações pontuais que acarretam substituição da adenina na posição 2058 ou na posição 2059 na região do gene rrl que codifica o domínio peptidil transferase do rRNA 23S. Um mecanismo secundário de resistência à claritromicina tem sido descrito como resistência induzida, que é conferida pelo polimorfismo T/C no nucleotídeo 28 do gene erm(41). A resistência adquirida pode ser detectada em até 3 dias de incubação do M. abscessus com a claritromicina enquanto que a resistência induzida requer mais do que 5 dias de incubação. Por outro lado, o uso de marcadores moleculares para detecção de resistência adquirida e induzida no complexo M. abscessus têm sido propostos. O objetivo desse estudo foi avaliar o perfil de suscetibilidade e os marcadores moleculares de resistência à claritromicina no complexo M. abscessus. Um total de 42 isolados de um estudo prévio de vigilância, entre os anos 2007 e 2013 foram utilizados. O perfil de suscetibilidade para a claritromicina foi determinado por microdiluição em caldo com leituras em 3, 5, 7 e 14 dias. Mutações nos genes rrl e erm(41) foram avaliados por PCR com primers específicos e posterior sequenciamento. Resistência à claritromicina, em até 3 dias de incubação, foi observada em 31 dos 42 (73,8%) isolados. Resistência induzida à claritromicina foi observada em 6 de 11 (54,5%) isolados que apresentaram resistência após 5 ou 7 dias de incubação. Todos os isolados com resistência induzida foram M. abscessus subsp. massiliense. Além disso, todos os 28 isolados de M. abscessus subsp. massiliense apresentaram deleção em erm(41). Apenas cinco isolados foram sensíveis à claritromicina após 14 dias de incubação. Nenhum dos 42 isolados apresentaram mutação pontual na região de peptidil transferase do rRNA 23S e todos os isolados apresentaram o polimorfismo T/C no nucleotídeo 28 do gene erm(41). Os dados deste estudo indicam a falta de correlação dos marcadores moleculares com a expressão de resistência à claritromicina.

Infections due to Mycobacterium abscessus complex used to respond to clarithromycin treatment but more recently treatment failure with this antibiotic has been reported. Acquired resistance to clarithromycin is related to substitutions at the adenine either at position 2058 or at position 2059 in a region of the rrl gene encoding to the peptidyltransferase domain of the 23S rRNA. A secondary mechanism related to clarithromycin resistance has been described as an inducible resistance, conferred by T/C polymorphism at the 28th nucleotide in erm(41) gene. Acquired resistance can be detected up to 3 days of incubation of the M. abscessus with the clarithromycin while inducible resistance requires more than 5 days of incubation. Molecular markers to detect acquired and inducible resistance in M. abscessus complex isolates were proposed. This study evaluated the profile of susceptibility and the molecular markers of clarithromycin resistance in M. abscessus complex. A total of 42 isolates from a previous surveillance study (2007 to 2013) were used in this study. The susceptibility profile for clarithromycin was determined by broth microdilution with reads at 3, 5, 7 and 14 days. Mutations in rrl and erm(41) genes were evaluated by PCR with specific primers followed by sequencing. Clarithromycin resistance, up to 3 days of incubation, was observed in 31 of 42 (73.8%) isolates. Inducible clarithromycin resistance was observed in 6 of 11 (54.5%) isolates which presented resistance only after 5 or 7 days of incubation. All isolates with inducible resistance were identified as M. abscessus subsp. massiliense. Moreover, all 28 M. abscessus subsp. massiliense had a deletion in erm(41). Only five isolates proved to be susceptible to clarithromycin after 14 days of incubation. None of the 42 isolates presented a point mutation in the peptidyltransferase region of the 23S rRNA (rrl) and all isolates presented the T/C polymorphism at the 28th nucleotide of the erm(41) gene. The data of this study indicates a lack of correlation of molecular markers of clarithromycin resistance for both acquired and inducible resistance to clarithromycin.