Padronização da atividade total da glutamato descarboxilase em cérebro de ratos

Abstract

O ácido γ-aminobutirico (GABA) é o principal neurotransmissor inibitório do sistema nervoso central (SNC) de mamíferos. A sua síntese é mediante a uma reação catalítica envolvendo a descarboxilação do glutamato através da atividade da glutamato descarboxilase (GAD). O Objetivo deste estudo foi padronizar uma técnica capaz de medir a atividade total da GAD, utilizando córtex e hipocampo de ratos. Neste processo, utilizou-se 65 ratos wistar machos (200-300g de peso). Todas as reações foram realizadas sobre as condições de pH 6,4 e temperatura a 37°. O princípio da técnica basea-se na atividade total oxidativa do homogenato, subtraindo-se a oxidação da GAD inibida por penicilinamina. Quatro variáveis foram levadas em consideração, atividade radioativa específica, diluição do tecido, tempo de reação e gradiente de substrato. A menor atividade radioativa específica obtida foi com 0,05 uCi [C-14(U)]Glu, sendo de 0,305 ± 0,022 nmol CO2/mg/h. A melhor condição de diluição para o hipocampo foi 1:20 p/v e para córtex foi 1:10 p/v. O melhor tempo de reação para ambas as estruturas foi de 1h. Vmax e Km aparente foi de 1,252 nmol CO2/mg/h e 25,55, e 0,902 nmol CO2/mg/h e 15,87, para hipocampo e córtex, respectivamente. Nosso estudo demonstrou que é possível obter-se medidas replicáveis e confiáveis da atividade específica da GAD, utilizando-se apenas hipocampo e córtex provenientes de um hemisfério cerebral.