Células com cinase humana Nek1 silenciada apresentam maior sensibilidade a agentes mutagênicos

Abstract

Em mamíferos, o ciclo e a divisão celular são coordenados por diferentes proteínas cinases que atuam em fases distintas do ciclo, regulando a sua progressão. Dentre essas estão as Neks, que participam da formação do centrossomo e do fuso mitótico. As Neks são cinases humanas evolutivamente conservadas e estruturalmente relacionadas à NIMA, um regulador mitótico descrito em Aspergillus nidulans. A Nek1, uma das isoformas das Neks, parece estar envolvida na resposta celular inicial à radiação ionizante, além de participar da etiologia da Doença Policística do Rim. Já foi demonstrado também que a Nek1 interage com proteínas relacionadas ao reparo de danos ao DNA e à regulação do ciclo celular. Resultados anteriores obtidos pelo nosso grupo mostraram que células silenciadas para a Nek1 apresentam retardo no reparo de danos ao DNA induzidos por agentes mutagênicos. Esses estudos indicam que modificações na sua estrutura e mesmo a sua deleção podem levar a alterações no ciclo celular normal em situação de estresse genotóxico, induzindo danos ao material genético e até mesmo a morte dessas células. Para comprovar que células com a Nek1 ausente são mais sensíveis a agentes genotóxicos, utilizamos duas linhagens celulares humanas, Hek293T e U87, silenciadas por RNA de interferência. Essas células foram expostas a diferentes agentes genotóxicos e, posteriormente, a sobrevivência foi avaliada através de ensaio de MTT e através de um ensaio preliminar de contagem de células em microscopia de fluorescência. Resultados do MTT indicaram uma diminuição na sobrevivência das células silenciadas das linhagens U87 e HEK293T, em relação às selvagens, após o tratamento com os diferentes mutagênicos. Os resultados preliminares de contagem celular utilizando células U87 silenciadas, tratadas com diferentes concentrações de H₂O₂, indicam uma menor sobrevivência das células silenciadas em relação às selvagens apenas em um dos dias de análise. Apesar dos indícios de que o silenciamento da Nek1 em linhagens celulares humanas aumenta sua sensibilidade a genotóxicos, mais estudos são necessários para elucidar o mecanismo exato de ação dessa enzima.