Estabelecimento de um modelo de crescimento tumoral em membrana corioalantóide de embriões de galinha

Abstract

Cânceres são caracterizados pela proliferação celular descontrolada e invasão do tecido adjacente. A aquisição desta capacidade invasiva pode permitir que o tumor estabeleça metástases em outros órgãos. Estima-se que aproximadamente 90% dos óbitos em câncer sejam causados pelas metástases. Apesar dos avanços observados nas últimas décadas, muitos aspectos envolvidos na progressão tumoral e formação de metástases são pouco entendidos, o que se deve, pelo menos parcialmente, à carência de modelos in vivo para estudo destes fenótipos. Neste contexto, a membrana corioalantóide (CAM), uma estrutura extraembrionária altamente vascularizada formada pela fusão parcial do córion e do alantóide durante o desenvolvimento do embrião de galinha, emerge como um potencial modelo não apenas para estudos de progressão tumoral, mas também para investigação de potenciais terapias. O objetivo deste trabalho foi estabelecer um modelo de estudo de desenvolvimento tumoral em CAM. Para isso, 3,5x105 células da linhagem de adenocarcinoma mamário MCF7 foram aplicadas na CAM no dia 10 (E10) de desenvolvimento embrionário e, após 7 dias de incubação com as células, os ovos foram analisados quanto ao desenvolvimento e crescimento do tumor. Para o estabelecimento do modelo, diferentes tipos de intervenções foram testadas, tais como preparo prévio dos ovos (retirada de diferentes volumes de albumina para facilitar a aplicação das células tumorais) e abrasão da CAM na região de aplicação das células. Como desfechos foram avaliadas as taxas de mortalidade embrionária e de desenvolvimento tumoral. Observamos que a manipulação prévia do ovo com remoção de maior volume de albumina (4 mL), abertura de janela na casca e abrasão da CAM aumentaram a taxa de mortalidade dos embriões, enquanto a remoção com menor volume de albumina (1 mL) e sem abertura prévia da casca está associada com menor taxa de mortalidade. Além disso, a taxa de formação de tumores foi maior no grupo com menor intervenção (remoção de 1 mL de albumina) do que no grupo com maior intervenção, indicando que a remoção prévia de albumina é importante, mas que a abertura da casca deve ser realizada no momento de aplicação das células. Concluindo, nós fomos capazes de estabelecer um modelo de crescimento tumoral em CAM de embrião de galinha. A manipulação prévia mínima do ovo fertilizado reduz a mortalidade embrionária e aumenta a taxa de desenvolvimento tumoral.

Cancers are characterized by uncontrolled cell proliferation and invasion of adjacent tissue. The acquisition of this invasive capacity may allow the tumor to establish metastases in other organs. It is estimated that approximately 90% of cancer deaths are caused by metastases. Despite the advances observed in recent decades, many aspects involved in tumor progression and metastasis formation are poorly understood, which is at least partially due to the lack of in vivo models to study these phenotypes. In this context, the chorioallantoic membrane (CAM), a highly vascularized extraembryonic structure formed by partial fusion of the chorion and allantois during chick embryo development, emerges as a potential model not only for studies of tumor progression, but also for research of potential therapies. The aim of this work was to establish a study model of tumor development in CAM. For this, 3.5x105 cells of MCF7 mammary adenocarcinoma lineage were applied onto CAM on day 10 (E10) of embryonic development and, after 7 days of incubation with the cells, the eggs were analyzed for tumor development and growth. To establish the model, different types of interventions were tested, such as prior preparation of the eggs (withdrawal of different volumes of albumin to facilitate the application of tumor cells) and abrasion of the CAM in the region of cells application. As outcomes, embryonic mortality and tumor development rates were evaluated. We observed that previous manipulation of the egg with removal of a higher volume of albumin (4 mL), opening of a window in the shell and abrasion of the CAM increased the mortality rate of the embryos, while removal with a smaller volume of albumin (1 mL) and without opening the eggshell was associated with a lower mortality rate. In addition, the rate of tumor formation was higher in the group with less intervention (removal of 1 mL of albumin) than in the group with greater intervention, indicating that previous removal of albumin is important, but that the opening of the eggshell must be performed at the time of application of the cells. In conclusion, we were able to establish a model of tumor growth in chicken embryo CAM. Minimal prior manipulation of the fertilized egg reduces embryonic mortality and increases the rate of tumor development.