Avaliação de genes envolvidos na produção de células gigantes de Cryptococcus neoformans

Abstract

Os fungos são responsáveis por grande número de infecções anuais, chegando à marca de 2 milhões de mortes por ano. Dentre as infecções fúngicas mais preocupantes, destaca-se a criptococose, causando aproximadamente 180.000 óbitos anuais. A criptococose é uma infecção sistêmica causada majoritariamente pelo fungo Cryptococcus neoformans e acomete principalmente indivíduos imunocomprometidos, podendo causar meningite criptocócica, uma doença extremamente letal onde as células fúngicas, após colonização do pulmão do hospedeiro, se disseminam para o cérebro pela via hematogênica e desencadeiam um quadro infeccioso. Devido ao grave cenário relacionado a criptococose, torna-se importante conhecer os recursos de patogenicidade que C. neoformans desempenha nesta infecção. Dentre estes recursos, destaca-se a formação de células gigantes, importantes para a sobrevivência e disseminação do patógeno no hospedeiro, que em estudos anteriores foi parcialmente caracterizada, tendo relação estabelecida com o fator de transcrição Pdr802. Apesar disso, alguns genes regulados por esse fator de transcrição carecem de caracterização. O presente trabalho consiste em avaliar os genes CNAG_01602 e CNAG_07538 como potenciais responsáveis pela formação de células gigantes em C. neoformans. Para tal, foram construídos mutantes nulos para os genes de estudo, e utilizado como controles as linhagens selvagens (H99) e pdr802 (linhagem com deleção de PDR802). As linhagens de estudo foram submetidas a indução de células gigantes in vitro com posterior quantificação do percentual formado por citometria de fluxo. Além disso, análises de microscopia também foram realizadas para avaliar o diâmetro total das células formadas, como também, do tamanho celular de cada linhagem. Os resultados mostraram que o gene CNAG_07538 pode estar envolvido na formação de células gigantes em C. neoformans.

Fungi are responsible for numerous annual infections, reaching the mark of 2 million deaths each year. Among the most concerning fungal diseases , cryptococcosis stands out, accounting for approximately 180,000 deaths annually. Cryptococcosis is a systemic infection primar i ly caused by the yeast Cryptococcus neoformans . It mainly affects immunocompromised individuals and is characteri zed by its lethal manifestation a cryptococcal meningitis . After colonizing the host’s lung s , the yeast spreads to the brain , trigger ing an infectious condition. Giving the gravity of cryptococcosis , understanding the pathogenic mechanisms of C. neoformans during the infection is important . Among these mechanisms , the formation of titan cells stands out, as they play a crucial role in the survival and dissemination of the pathogen whit in the host . While previous studies have shown the regulation of titan cell formation by the transcription factor Pdr802, the specific genes that are regulated by this transcription factor have not yet been fully elucidated. The present work aims to assess the potential involvement of genes CNAG_01602 and CNAG_07538 in the forma tion of titan cells in C. neoformans To achieve this, null mutants were constructed for the target genes, and the strains wild type H99 and pdr 802 (strain lacking the PDR802 gene) were used as controls . All the strains were submitted to titan cell induction in vitro with subsequent quantification of the percentage formed through flow cytometry Additionally, microscopy analy s es were also performed to evaluate the total diameter and cell body sizes of the cells formed by each strain. The results s uggest that the gene CNAG_07538 may be potentially involved in titan cell formation in C. neoformans