Produção e caracterização de proteínas recombinantes de Mycoplasma hyopneumoniae com potencial para utilização em imunodiagnóstico e vacinação

Abstract

A pneumonia enzoótica suína, cujo agente etiológico é a bactéria Mycoplasma hyopneumoniae, causa grandes perdas econômicas a produtores de todo o mundo devido à morbidade e vulnerabilidade a patógenos secundários. Não há tratamento totalmente efetivo, e as vacinas disponíveis são insatisfatórias. Dessa forma, a produção de vacinas baseadas em proteínas recombinantes é uma alternativa interessante, desde que haja um repertório satisfatório de antígenos caracterizados e disponíveis para testes de imunoproteção. Neste contexto, os objetivos deste estudo foram a expressão e caracterização imunológica preliminar dos produtos de três seqüências codificadoras (CDS) de M. hyopneumoniae da cepa patogênica 7448: SecA, FtsH e MHP0278. As CDS foram selecionadas a partir de análises in silico, por codificarem proteínas potencialmente localizadas na superfície antigênicas e/ou relacionadas com a virulência da bactéria. Primers foram projetados para amplificar regiões específicas das CDS, preditas como extracelulares. As seqüências amplificadas foram clonadas por recombinação homóloga em E. coli KC8. Os plasmídeos recombinantes foram transformados em E. coli BL21 Codon Plus-Ril para expressão das proteínas recombinantes, sendo que uma delas (FtsH) foi purificada através de cromatografia de afinidade. A antigenicidade da FtsH foi detectada através da reação com soro de suínos infectados ou experimentalmente imunizados contra M. hyopneumoniae, e a imunogenicidade de FtsH e SecA foi avaliada através de imunizações em camundongos. Através desse estudo, foram identificados dois novos antígenos de M. hyopneumoniae, e análises posteriores devem esclarecer seus papéis na virulência dessa bactéria, além da sua potencialidade de serem usados como componentes de uma vacina recombinante.