High frequency of potentially pathogenic yeast species in goat’s raw milk and creamed cheese in Southern Brazil

Abstract

Existem poucos relatos sobre isolamento, contagem e identificação de leveduras no leite de cabra in natura e derivados. O objetivo desse estudo foi avaliar a diversidade de leveduras encontradas no leite de cabra cru e no queijo cremoso de cabra coletados na região metropolitana de Porto Alegre, Brasil. Foi desenvolvida a técnica de HMA (Heteroduplex Mobility Assay) simplificada da região 26S rDNA D1/D2 para confirmar rapidamente a identificação de isolados pertencentes às espécies potencialmente patogênicas. Leveduras foram isoladas em 59% das amostras. Cinquenta e seis leveduras foram isoladas e identificadas nos gêneros Bullera, Candida, Cryptococcus, Debaryomyces, Dekkera, Pichia, Rhodotorula, Sporodiobolus, Trichosporon, Yarrowia e Zygoascus. A contagem média de leveduras no leite de cabra foi superior a 2 log UFC.mL-1, enquanto que a contagem no queijo foi superior a 3 log UFC.g-1. A atividade lipolítica esteve presente em 92% dos isolados, enquanto que apenas 14% tiveram atividade proteolítica. Doze isolados ascomicéticos potencialmente patogênicos foram identificados pela metodologia convencional de identificação de leveduras e correspondem às espécies Candida parapsilosis, Candida tropicalis e Pichia guilliermondii. Todos tiveram sua identificação confirmada pela técnica de HMA simplificada. Nenhum dos isolados potencialmente patogênicos foram resistentes aos antifúngicos testados. Mais estudos são necessários para avaliar o real significado do isolamento dessas leveduras clinicamente relevantes.

There are few reports concerning isolation, counting and identification of yeasts in goat´s raw milk and derivates. The objective of this study was to evaluate the diversity of yeasts found in raw goat milk and goat creamed cheese collected in a Metropolitan area in Porto Alegre - Brazil. A simplified HMA (Heteroduplex Mobility Assay) of the 26S rDNA D1/D2 region was developed in order to rapidly confirm the identification of the isolates belonging to potentially pathogenic species. Yeasts were isolated from 59% of the samples. Fifty six strains were isolated and identified in the genera Bullera, Candida, Cryptococcus, Debaryomyces, Dekkera, Pichia, Rhodotorula, Sporodiobolus, Trichosporon, Yarrowia and Zygoascus. The average yeast count in raw milk was superior to 2 log UFC.mL-1, while cheese count was superior to 3 log UFC.g-1. Lipolytic activity was present in almost 92% of the isolates, while only 14% had proteolytic activity. Twelve potentially pathogenic ascomycetic isolates were identified by the conventional yeast identification methodology, and correspond to the species Candida parapsilosis, Candida tropicalis and Pichia guilliermondii. All of them had their identities confirmed by the simplified HMA assay. None of the isolates belonging to potentially pathogenic species were resistant to the antifungal agents tested. More studies are necessary to evaluate the real significance of the isolation of these clinically relevant yeasts.