Preparation of biological samples containing both metallic and organic structures for SEM

Abstract

Objective: results of preclinical studies depend on high-quality sample preparation, which enables proper handling of specimens for observation and analysis with the desired methods. The aim of this paper is to describe a step-by-step method for preparation of bone tissue specimens containing metallic implants for scanning electron microscopy (SEM). Methodology: eight rabbit bone specimens containing one osseointegrated implant each were fixated in 10% neutral buffered formalin, dehydrated, sectioned, and embedded in thermosetting resin. The specimens were then sanded, polished, and metal-coated for SEM analysis. Results: the method achieved satisfactory specimen surface smoothness, containing no cracks or other artifacts, enabling morphological and chemical analysis by means of SEM and energy-dispersive X-ray spectroscopy (EDS). Conclusion: this method for preparation of animal tissue samples containing both organic and metal components produced specimens amenable to SEM analysis with excellent image quality, enabling assessment of the bone–implant interface, measurement of bone–implant contact, and quantification of bone formation.

Objetivo: o resultado das pesquisas pré-clínicas dependem da elevada qualidade de preparo amostral, possibilitando um adequado manejo das peças para a observação nos mais diversos tipos de metodologia. O objetivo foi apresentar detalhadamente um método diferenciado para preparo de amostras de tecido-ósseo contendo implantes metálicos para Microscopia Eletrônica de Varredura, apresentando os passos para obtenção das peças. Metodologia: oito peças ósseas de modelo experimental coelho contendo um implante osseointegrável foram fixadas por 72 horas em formol 10% neutro tamponado. A seguir, procedeu-se sua secagem, corte e inclusão em resina termopolimerizável. Posteriormente, realizou-se um processo de lixamento sequencial, polimento e metalização para avaliação por meio de MEV. Resultados: as superfícies obtidas por meio desta metodologia demonstraram lisura superficial e ausência de trincas ou outros artefatos. Permitiu análise morfológica e química por meio de MEV/EDS. Conclusão: por meio desta metodologia, obteve-se amostras contendo componente orgânico e metálico, passíveis de análise por MEV em modelo experimental animal, com grande qualidade de imagem para estudo da interface osso-implante, medição do contato entre estas superfícies e avaliação da área de neoformação óssea.