O efeito da associação aspartato de ornitina e vitamina E no tratamento da doença hepática gordurosa não-alcoólica em modelo experimental em ratos

Abstract

Introdução: A doença hepática gordurosa não-alcoólica (DHGNA) é a doença hepática crônica cuja incidência mais cresce em todo o mundo devido à sua associação com obesidade e síndrome metabólica. Embora pioglitazona e Vitamina E (VitE) possam ser recomendadas em populações selecionadas, seu tratamento específico ainda não está bem estabelecido e alternativas têm sido estudadas. O objetivo deste estudo é avaliar o efeito da associação de aspartato de ornitina (LOLA) e VitE em modelo animal de DHGNA. Métodos: Ratos Sprague Dawley machos (n=40) receberam dieta hiperlipidica deficiente em colina (DHDC) ou ração habitual (n=10) por 28 semanas. A partir da 16ª semana foram administrados, durante 12 semanas, por gavagem, água destilada esterilizada (grupo DHGNA, n=10, grupo controle, n=10), aspartato de ornitina (LOLA; n=10), vitamina E (VitE; n=10) ou a associação de aspartato de ornitina com vitamina E (LOLA+VitE; n=10). Na eutanásia foram coletadas amostras de sangue, tecido hepático, intestinal, cardíaco, gordura epicárdica e fezes. Resultados: Ao final, os animais dos grupos intervenção apresentaram maior variação do peso desde o início do estudo, e aumento da circunferência abdominal, tecido adiposo visceral e peso do fígado fresco em relação ao controle (p<0,001 para todos), sem que houvesse diferença entre eles. Os níveis de AST e glicemia foram significativamente maiores (p < 0,001 e p 0,003 respectivamente) no grupo DHGNA e não diferiram entre os demais. Em relação aos demais grupos que receberam DHDC, a associação LOLA+VitE reduziu os níveis de colesterol total (p 0,024) e aumentou os níveis de HDL colesterol (p < 0,001), e os níveis de triglicerídeos foram menores com LOLA e LOLA+VitE em relação aos demais grupos (p 0,004). Em relação aos marcadores inflamatórios hepáticos, os animais que receberam LOLA tiveram níveis de Il 10 similares ao CON e maiores que 2 os demais grupos (p 0,002). Os animais que receberam LOLA+VitE expressaram menos Myd88 que os controles (p <0,001), e Tlr4 e Myd88 foram inferiores no grupo VitE em relação ao grupo DHGNA (p 0,009 e < 0,001, respectivamente). Houve indução de DHGNA em todos os animais dos grupos intervenção. Balonização hepatocitária esteve presente em 60% dos animais do grupo DHGNA, 50% dos grupos LOLA e VitE e em 20% dos tratados com LOLA+VitE, e fibrose hepática, em 60% do grupo DHGNA, 40% dos grupos LOLA e VitE e 20% do grupo LOLA+VitE. As medianas da quantificação da fibrose hepática em unidades de luminescência relativa foram 0,40 (0,12-0,69), 1,16 (0,48-1,66), 0,28 (0,20-0,85), 0,96 (0,12-1,38) e 0,62 (0,13-0,98) nos grupos CON, DHGNA, LOLA, VitE e LOLA+VitE, respectivamente (p 0,003). O peso da gordura epicárdica foi menor nos animais controles que nos demais. Em relação aos índices aterogênicos (índice de Casteli-II e coeficiente aterogênico), a associação LOLA+VitE apresentou níveis similares ao grupo CON e inferiores aos demais grupos (p < 0,001). Não houve diferença entre os grupos na expressão dos marcadores de permeabilidade intestinal. Conclusões: A associação LOLA+VitE correlacionou-se com menor lesão hepática e foi mais eficaz na correção da dislipidemia associada à DHGNA e na redução do risco cardiovascular aferido pelos índices aterogênicos que LOLA e VitE isoladamente.

Introduction: Non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) is the chronic liver disease with the faster growing incidence worldwide due to its association with obesity and metabolic syndrome. Although pioglitazone and Vitamin E (VitE) may be recommended in selected patients, its specific treatment is not yet well established, and alternatives have been studied. The aim of this study is to evaluate the effect of the association of ornithine aspartate (LOLA) and VitE in an animal model of NAFLD. Methods: Male Sprague Dawley rats (n = 40) received a choline-deficient hyperlipid diet (CDHD) or standard diet (n = 10) for 28 weeks. From the 16th week onwards, sterile distilled water (NAFLD group, n= 10; controls - CON, n = 10) was administered through gavage, LOLA (n= 10), VitE (n= 10) or LOLA+VitE (n= 10). Blood, liver, intestine, heart, epicardial fat and feces samples were collected after euthanasia. Results: Animals in the intervention groups showed greater weight variation from baseline, and also higher waist circumference, visceral adipose tissue and fresh liver weight compared to the controls (p <0.001 for all), without any difference between them. AST and glycemia were significantly higher (p <0.001 and p 0.003 respectively) in the NAFLD group and did not differ among the others. LOLA+VitE decreased total cholesterol (p 0.024) and increased HDL cholesterol (p <0.001) in comparison to CDHD groups. Triglycerides were lower with LOLA and LOLA + VitE compared to the other groups (p 0.004). Regarding liver inflammatory markers, the animals that received LOLA had IL 10 similar to the CON and higher than the other groups (p 0.002). Also, they expressed less Myd88 than the controls (p <0.001). Tlr4 and Myd88 were lower in the VitE group compared to NAFLD animals (p 0.009 and <0.001, respectively). NAFLD was induced in all animals in the intervention groups. Hepatocyte ballooning was present in 60% of the NAFLD animals, 50% in those who received 4 LOLA or VitE and 20% of those treated with LOLA+VitE; liver fibrosis was present in 60% of the NAFLD animals, 40% LOLA or VitE groups, and 20% in LOLA+VitE animals. The medians of quantification of hepatic fibrosis in units of relative luminescence were 0.40 (0.12-0.69), 1.16 (0.48-1.66), 0.28 (0.20-0.85 ), 0.96 (0.12-1.38) and 0.62 (0.13-0.98) in CON, NAFLD, LOLA, VitE and LOLA+VitE groups, respectively (p 0.003). The weight of epicardial fat was lower in CON than in the others. Regarding atherogenic indices (Casteli-II index and atherogenic coefficient), results with LOLA+VitE were similar to CON and lower than the others (p <0.001). There was no difference between groups in the expression of intestinal permeability markers. Conclusions: LOLA+VitE correlated with less severe liver damage and was more effective in correcting NAFLD-associated dyslipidemia and in reducing the cardiovascular risk through atherogenic indexes than LOLA or VitE alone.