Aplicação da técnica de reação em cadeia da polimerase fluorescente quantitativa (QF-PCR) para detecção de aneuploidias em gestações de alto risco, fetos mortos sem diagnóstico e material de restos placentários de múltiplas perdas gestacionais

Abstract

Introdução: As aneuploidias mais comuns, juntas, representam mais de 80% das anormalidades cromossômicas diagnosticadas no período pré-natal. Cerca de 15-25% das gestações acabam perdidas até o terceiro trimestre, sendo as anormalidades cromossômicas responsáveis por cerca de 50% dos abortamentos espontâneos. Quando encontrados no screening pré-natal indícios de aneuploidia a investigação citogenética torna-se fundamental. O uso de técnicas alternativas que possibilitam rapidez diagnóstica associada a alta sensibilidade vem se tornando uma realidade. A técnica de QF-PCR é uma técnica molecular capaz de detectar as principais aneuploidias em tecidos fetais em até 48 horas, não necessitando de cultivo celular para ser realizada. Objetivo: verificar a eficiência da metodologia QF-PCR em DNA de diferentes amostras, que não puderam ser analisadas previamente por técnicas citogenéticas, a fim de detectar aneuploidias. Metodologia: estudo transversal realizado no período de 2019 à 2020 de 25 amostras de DNA fetal armazenados em biorrepositório (12 eram de biópsia de cordão umbilical, 2 de vilosidades coriônicas de material de aborto, 6 de biópsia de pulmão, 1 de líquido amniótico, 1 de sangue e 3 de outros materiais), utilizando kit comercial para análise dos cromossomos 13,18,21,X e Y.Resultados: das 25 amostras analisadas, duas apresentaram razões alélicas indicativas de trissomia do cromossomo 18 e as demais apresentaram resultado normal para os cromossomos analisados. Cinco amostras com diagnóstico de cariótipo já estabelecido foram utilizadas para a padronização do procedimento. Conclusão: a técnica aplicada mostrou-se eficaz para análise de diferentes materiais fetais, que não puderam ser analisados anteriormente por técnicas citogenéticas, além de detectar alterações cromossômicas numéricas em diferentes materiais fetais. Entretanto, os cromossomos avaliados se restringem aos marcadores incluídos em cada kit e não permite a análise cromossômica global. Para tal, é necessária a inclusão de kits adicionais não avaliados neste projeto.

Background: the most common aneuploidies together represent more than 80% of the chromosomal abnormalities diagnosed in the prenatal period. About 15-25% of pregnancies are interrupted until the third quarter, being chromosomal abnormalities responsible for about 50% of miscarrieges. When evidence of aneuploidy is found in prenatal screening, cytogenetic investigation becomes essential. The use of alternative techniques that enable rapid diagnosis associated with high sensitivity has become a reality. The QF-PCR is a molecular technique capable of detecting the main aneuploidies in fetal tissues in a lower turnaround time not requiring cell culture to be performed. Objective: to verify the efficiency of the QF-PCR methodology in DNA from different samples, which could not be previously analyzed by cytogenetic techniques, in order to detect aneuploidies. Methods: cross-sectional study conducted in a tertiary hospital in Porto Alegre, Rio Grande do Sul with evaluation of 25 DNA samples of fetal tissue stored in a biorepository (12 were from umbilical cord biopsy, 2 from chorionic villi from, 6 from lung biopsy, 1 from amniotic fluid, 1 from blood and 3 from other materials), using a commercial kit for analysis of chromosomes 13.18, 21,X and Y. Results: of the 25 samples analyzed, two presented allelic ratios indicative of trisomy 18 and the others presented normal results. Five samples with karyotype results were used to standardize the procedure. Conclusion: The technique used proved to be efficient in detecting numerical chromosomal alterations in several fetal materials, which could not be previously analyzed by cytogenetic techniques, in addition to detecting numerical chromosomal changes in different fetal materials. Nevertheless the chromosomes evaluated are restricted to the markers included in each of the kits used and does not allow global chromosomal analysis. For this purpose, the inclusion of additional kits not evaluated here is necessary.