Efeitos citoprotetores de secreções obtidas da lagarta Lonomia obliqua sobre células-tronco endometriais humanas

Abstract

Introdução. A perda gestacional recorrente (PGR) está associada à morbidade física e psicológica grave, para a qual, quando se excluem causas anatômicas e genéticas, não há opções de tratamento. A fisiopatologia envolve a deficiência nas capacidades de proliferação e migração das células do estroma endometrial (hESCs), prejudicando a implantação e o desenvolvimento do embrião. Por isso, encontrar novas moléculas citoprotetoras capazes de estimular a proliferação de hESCs pode ser interessante. Uma vez que os venenos de animais são fontes ricas em moléculas bioativas, neste trabalho objetivamos caracterizar os efeitos citoprotetores do veneno da Lonomia obliqua em hESCs. Metodologia. hESCs foram isoladas de biópsias endometriais humanas frescas e caracterizadas de acordo com protocolos padrão. Em seguida, os efeitos das secreções venenosas de L. obliqua sobre a viabilidade, proliferação e migração celular foram determinados. Os componentes do veneno envolvidos nos efeitos de proliferação celular também foram identificados por métodos cromatográficos clássicos e análises proteômicas. Resultados. O veneno de L. obliqua induz a proliferação, viabilidade e migração de hESC de uma maneira dependente da dose, tanto na presença como nas condições de privação de soro. Por cromatografia de troca iônica foi obtida uma fração enriquecida em componentes citoprotetores desprovidos de efeito hemotóxico. A análise proteômica do veneno identificou pelo menos seis classes de proteínas com propriedades citoprotetoras potenciais (hemolinas, lipocalinas, hemocianinas, proteínas antivirais, peptídeos antimicrobianos e inibidores de protease). O mecanismo envolvido na citoproteção parece estar relacionado à regulação negativa da geração do ânion superóxido, aumento das enzimas antioxidantes, produção de óxido nítrico e ativação de vias de proliferação dependentes de ERK. 8 Conclusões. A viabilidade, proliferação e migração de hESC induzidas por veneno de L. obliqua ocorreram principalmente por proteção contra dano oxidativo e ativação da via dependente de ERK. Assim, esta é uma ferramenta farmacológica promissora para compreender os mecanismos subjacentes da deficiência de hESC em PGR.

Background. Recurrent pregnancy loss (RPL) is associated with severe physical and psychological morbidity, for which there is no treatment options when excluded anatomic and genetic causes. The pathophysiology involves deficiency in proliferation and migration capacities of endometrial stromal cells (hESCs) impairing embryo implantation and development. Thus, finding new cytoprotective molecules able to stimulate hESCs proliferation could be interesting. Since animal venoms are rich source of bioactive molecules, in this work we aimed to characterize the cytoprotective effects of Lonomia obliqua venom on hESCs. Methodology. hESCs were isolated from fresh human endometrial biopsies and characterized according standard protocols. Then the effects of L. obliqua venomous secretions on cell viability, proliferation and migration were determined. Venom components involved in cell enhancing effects were also identified by classical chromatographic methods and proteomic analysis. Results. L. obliqua venom induced hESC proliferation, viability and migration in a dose-dependent manner both in the presence and serum deprivation conditions. By ion-exchange chromatography was obtained one fraction enriched in cytoprotective components devoid of hemotoxic effect. Venom proteomic analysis identified at least six protein classes with potential cytoprotective properties (hemolins, lipocalins, hemocyannins, antiviral proteins, antimicrobial peptides and protease inhibitors). The mechanism involved in cryoprotection seems to be related to downregulation of superoxide anion generation, increase in antioxidant enzymes, nitric oxide production and activation of ERK-dependent pathways of proliferation. Conclusions. L. obliqua venom-induced hESC viability, proliferation and migration occurred mainly by protection against oxidative damage and ERK-dependent pathway activation. 10 Thus, this is a promising pharmacological tool to understand underlying mechanisms of hESC deficiency in RPL.