Implementação da citometria de fluxo como ferramenta diagnóstica em neuroblastomas da infância

Abstract

Introdução: Neuroblastoma (NB) é o tumor sólido extracraniano mais comum da infância, sendo responsável por 8-10% das neoplasias nesta faixa etária. Nos últimos anos houve uma expansão no uso da imunofenotipagem por Citometria de Fluxo (CF) no diagnóstico e acompanhamento de neoplasias sólidas da infância. No caso do NB, o uso da CF pode diminuir o tempo até o diagnóstico, além de permitir uma melhor estratificação de risco. Objetivos: No presente estudo comparamos a CF e o exame anatomopatológico (AP) de crianças com NB quanto à sensibilidade e especificidade, e tempo até obtenção de resultado. Métodos: Foram analisadas 48 amostras (27 medulas ósseas (MO), 10 sangues periféricos (SP), 8 tumores primários (TP) e 2 nódulos hepáticos (NH) e 1 fragmento de costela (FC) de 21 pacientes com suspeita/diagnóstico de NB no período de maio de 2019 a agosto de 2020. As células foram marcadas com anticorpos monoclonais conjugados com fluorocromos CD9 Pacific Blue, CD45 Pacific Orange, CD73 PE, GD2 PerCP-Cy5.5, CD56 PE-Cy7, CD90 APC e CD81 APC-H7 com posterior aquisição no citômetro FACSCanto II e análise no software Infinicyt™. Os resultados dos exames anatomopatológicos foram extraídos dos prontuários. Resultados: Os pacientes apresentaram uma mediana de 59 meses de idade (mínimo 0; máximo 325 meses), destes 12 eram do sexo masculino (57.1%, 12/21). O tempo de liberação dos resultados entre as duas metodologias, a mediana na CF foi de 30 horas e 19 minutos e no AP foi de 94 horas e 49 minutos (P < 0.05). Das 48 amostras analisadas por CF 13 amostras (7 MO, 5 TP e 1 NH) apresentaram-se positivas para NB e 8 (3 MO e 5 TP) amostras foram positivas para NB no anatomopatológico. As duas técnicas foram concordantes em 88.9% dos casos. Considerando o AP como padrão-ouro a CF obteve uma sensibilidade de 100%, especificidade de 86%, valor preditivo positivo de 67% e o valor preditivo negativo de 100%. Conclusão: este estudo demonstra que a CF pode ser usada como metodologia diagnóstica e de avaliação de comprometimento por NB; além de demonstrar vantagem na sensibilidade quando comparada ao anatomopatológico. Esta metodologia permite, assim, diagnóstico rápido e classificação precisa da doença, e pode auxiliar no monitoramento do tratamento.

Background: Neuroblastoma (NB) is the most common extracranial solid tumor in childhood, being responsible for 8-10% of neoplasms in this age group. In recent years, there has been an expansion in the use of Flow Cytometry (FC) immunophenotyping in the diagnosis and monitoring of childhood solid neoplasms. In the case of NB, the use of FC can decrease the time until diagnosis, in addition to allowing better risk stratification. Objectives: In the present study, we compared the FC and the anatomopathological examination (PA) of children with NB regarding sensitivity and specificity, and the time to obtain a result. Methods: forty - eight samples were analyzed (27 bone marrow (BM), 10 peripheral blood (PB), 8 primary tumors (PT) and 2 hepatic nodule (HN) and 1 rib fragment (RF) from 21 patients with suspected/diagnosed NB in the period from May 2019 to August 2020. The cells were stained with monoclonal antibodies conjugated with fluorochromes CD9 Pacific Blue, CD45 Pacific Orange, CD73 PE, GD2 PerCP-Cy5.5, CD56 PE-Cy7, CD90 APC and CD81 APC-H7 with subsequent acquisition on the FACSCanto II cytometer and analysis on the Infinicyt™ software. The results of the anatomopathological exams were extracted from the medical records. Results: The patients had a median of 59 months of age (minimum 0; maximum 325 months), of these 12 were male (57.1%, 12/21). The results release time between the two methodologies, the median in FC was 30 hours and 19 minutes and in the PA it was 94 hours and 49 minutes ( P < 0.05). Of the 48 samples analyzed by CF 13 samples (7 BM, 5 PT and 1 HN) were positive for NB and 8 (3 BM and 5 PT) samples were positive for NB in the anatomopathological. The two techniques were in agreement in 88.9% of the cases. Considering the PA as the gold standard, the FC obtained a sensitivity of 100%, a specificity of 86%, a positive predictive value of 67% and a negative predictive value of 100%. Conclusion: This study demonstrates that FC can be used as a diagnostic and assessment methodology for impairment by NB; in addition to demonstrating an advantage in sensitivity when compared to anatomopathological. This methodology thus allows for rapid diagnosis and accurate classification of the disease, and can assist in monitoring the treatment.