Avaliação de células tronco tumorais no câncer de pãncreas por imunohistoquímica Tissue Microarray

Abstract

Introdução: O adenocarcinoma ductal pancreático (ADP) é uma doença altamente agressiva usualmente diagnosticada em estágio avançado e para a qual poucas terapias efetivas estão disponíveis. É uma neoplasia cuja incidência é quase igual à mortalidade. A razão pela qual o câncer de pâncreas apresenta prognóstico tão reservado e o porquê da baixa resposta terapêutica ao tratamento quimio e radioterápico ainda são questões que têm motivado a busca de uma resposta que possa, de alguma maneira, modificar o curso desta neoplasia. Entre processos mais recentemente envolvidos na carcinogênese e progressão tumoral, as alterações em células tronco tumorais (CSCs, do inglês cancer stem cells) são processos ainda pouco estudados no câncer de pâncreas, sem resultados satisfatórios, merecendo, portanto, maiores esforços na elucidação do seu comportamento e relação com a aquisição do fenótipo maligno pancreático. Recentes evidências têm sugerido que as CSCs desempenham um papel crucial não só na geração e manutenção de diferentes tecidos, mas também no desenvolvimento, progressão e resistência terapêutica de diferentes tipos tumorais. Objetivos: Estudar o perfil de expressão de marcadores de CSCs no adenocarcinoma ductal pancreático por técnica de imunohistoquímica. Isso será realizado por meio da análise do perfil de marcação de células pancreáticas tumorais pelos anticorpos CD24, CD133 e Oct4 utilizando a técnica de tissue microarray em peças provenientes de resseção pancreática e biópsias e posterior correlação dos achados com dados clínicos, resposta terapêutica, sobrevida global e livre de doença dos pacientes incluídos no estudo, a fim de determinar o papel prognóstico dos marcadores anteriormente descritos. Materiais e métodos: Uma análise clinicopatológica, retrospectiva, foi realizada em 112 pacientes diagnosticados com câncer de pâncreas entre os anos de 2005 e 2010, e realizado estudo imunohistoquímico com os anticorpos CD133, CD24 e Oct4 pela técnica de Tissue Microarray para a detecção de células com fenótipos de células tronco tumorais, com posterior correlação dos resultados com dados clínicos, de progressão tumoral, resposta terapêutica e sobrevida. As amostras do estudo compreendem casos de Adenocarcinoma ductal pancreático, os quais foram selecionados a partir da rotina assistencial do Hospital de Clínicas de Porto Alegre, junto ao Serviço de Patologia. Marcação nuclear ou citoplasmática positiva para cada anticorpo foi medida quanto à intensidade, sendo classificadas dicotomicamente em grupos de baixa/moderada intensidade ou forte. Os resultados foram analisados em relação aos parâmetros clinicopatológicos de cada paciente. Resultados: Os três marcadores de células tronco tumorais (CTTs) testados exibiram positividade nas células neoplásicas do câncer de pâncreas, corroborando com a hipótese da existência de CTTs no desenvolvimento e manutenção do fenótipo agressivo pancreático. Observou-se associação significativa entre a presença de alguns marcadores de células tronco-tumorais com variáveis de pior prognóstico, como a presença de metástase (p = 0,037), e tipo de tratamento realizado (apenas possibilidade de tratamento paliativo; p = 0,019). O grau de diferenciação tumoral mostrou relação, embora não significativa, com a positividade dos anti-corpos, onde o CD133 e CD24 mostraram uma prevalência alta em tumores pouco diferenciados, mais agressivos, enquanto que as células que expressaram o anti-corpo OCT4 exibiram maior potencial de diferenciação. A marcação positiva ao longo do estágio TNM mostrou-se uniforme, não se amplia conforme o estágio progride, estando presente desde os estágios iniciais do tumor. Sobrevida global e livre de doença não mostrou relação com a expressão dos anti-corpos. Conclusão: A expressão de células tronco-tumorais em amostras de Adenocarcinoma ductal pancreático indica a presença dessas células no processo de carcinogênese e desenvolvimento tumoral, com manutenção do fenótipo maligno pancreático e resistência terapêutica.

Introduction: Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is a highly aggressive disease usually diagnosed in an advanced stage and for which few effective therapies are available. It is a neoplasm whose incidence is almost equal to its mortality. The poor prognosis of pancreatic cancer and the low therapeutic response to chemotherapy and radiotherapy have motivated the search for an answer that can modify the course of this disease. Among the processes most recently implicated in carcinogenesis and tumor progression, changes in cancer stem cells (CSCs) are still poorly studied in pancreatic cancer with no satisfactory results, and are deserving of greater efforts in elucidating their effects and relationship with the acquisition of a pancreatic malignant phenotype. Recent evidence has suggested that CSCs play a crucial role not only in the generation and maintenance of different tissues, but also in the development, progression, and therapeutic resistance of different tumor types. Objectives: To study the expression profile of CSC markers in pancreatic ductal adenocarcinoma by immunohistochemistry. This will be accomplished by analyzing the tumor pancreatic cell labeling profile by CD24, CD133, and OCT4 staining using tissue microarray techniques on samples from pancreatic resection and biopsies and further correlating findings with clinical data, therapeutic responses, overall survival, and disease-free survival of the patients included in the study to determine the prognostic role of the previously described markers. Materials and methods: A retrospective clinicopathological analysis was performed on 112 patients diagnosed with pancreatic cancer between 2005 and 2010, and a CD133, CD24, and OCT4 immunohistochemical study was performed using the tissue microarray technique to detect cells with stem cell phenotypes. These results were correlated with clinical data, tumor progression, therapeutic response, and survival. The study samples included cases of PDAC, which were selected from the routine care of the Hospital de Clinicas de Porto Alegre from their Pathology Service. Positive nuclear or cytoplasmic labeling for each antibody was measured for intensity, and dichotomously classified into low/moderate or strong intensity groups. The results were analyzed relative to the clinicopathological parameters of each patient. Results: The three cancer stem cell markers (CSCsTTs) tested exhibited positivity in pancreatic cancer neoplastic cells, corroborating the hypothesis of the existence of CSCs in the development and maintenance of the pancreatic aggressive phenotype. Significant association was observed between the presence of some stem-tumor cell markers with worse prognostic variables, such as the presence of metastasis (p = 0.037), and type of treatment performed (only palliative treatment possibility; p = 0.019). The degree of tumor differentiation was related, although not significant, to antibody positivity, where CD133 and CD24 showed a high prevalence in more aggressive, poorly differentiated tumors, while cells expressing the OCT4 antibody showed a higher potential for differentiation. Positive labeling throughout the TNM stage was uniform, did not broaden as the stage progressed, and was present from the very early stages of the tumor. Overall, disease-free survival was not related to antibody expression. Conclusion: The expression of stem-tumor cells in pancreatic ductal adenocarcinoma samples indicates the presence of these cells in the process of carcinogenesis and tumor development, with maintenance of the pancreatic malignant phenotype and therapeutic resistance.