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dc.contributor.advisorPaz, Ana Helena da Rosapt_BR
dc.contributor.authorGonçalves, Fabiany da Costapt_BR
dc.date.accessioned2020-07-09T03:42:07Zpt_BR
dc.date.issued2017pt_BR
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/10183/211628pt_BR
dc.description.abstractIntrodução: As células estromais mesenquimais (MSC) são uma estratégia promissora para o tratamento de doenças inflamatórias. Embora as MSC tenham demonstrado potencial terapêutico no reparo tecidual, ainda há controvérsias sobre o tempo de sobrevivência e a distribuição dessas células nos tecidos receptores, devido ao aprisionamento celular nos capilares pulmonares após infusão intravenosa. Objetivos: Avaliar os efeitos terapêuticos dos fatores bioativos secretados pelas MSC e gerar partículas de membrana de MSC com propriedades imunomoduladoras, com o intuito de ampliar a biodistribuição do efeito terapêutico das MSC, evitando o aprisionamento celular nos capilares pulmonares, bem como proporcionar uma terapia mais segura baseada no potencial das MSC. Métodos: Na primeira etapa, foram avaliados os efeitos das MSC estimuladas com interferon-γ (IFN-γ) e dos fatores solúveis por elas secretados (meio condicionado; CM) em cultura organotípica de cólon murino com doença inflamatória intestinal induzida por dextran sulfato de sódio (DSS). Os explantes colônicos tratados com MSC ou CM por 24h foram analisados quanto à histologia, expressão de Ki-67 e produção de IL-6 no sobrenadante. Na segunda etapa desta tese, foi desenvolvida uma nova terapia livre de células baseada na geração de pequenas partículas de membrana plasmática (MP) de MSC. As MP foram geradas a partir de MSC e de MSC estimuladas com IFN-γ (MPγ). A atividade enzimática das MP foi avaliada e seus efeitos imunomoduladores foram testados em linfócitos T e monócitos. Resultados: No primeiro trabalho, foi demonstrado que os tratamentos com MSC e CM foram capazes de reduzir igualmente os danos histológicos presentes nos explantes colônicos; entretanto, apenas o tratamento com CM foi capaz de estimular a proliferação das células da mucosa. Além disso, o efeito terapêutico das MSC e do CM foi mediado pelos baixos níveis da citocina pró-inflamatória IL-6. O segundo trabalho demonstrou que as MP geradas artificialmente não só apresentam atividade de ATPase, nucleotidase e esterase, indicando que elas são enzimaticamente ativas, como também possuem propriedades imunomoduladoras, pois se ligaram seletivamente com a membrana plasmática dos monócitos e modularam sua função afetando a expressão gênica e induzindo a apoptose de monócitos pró-inflamatórios. Conclusão: Os resultados, em conjunto, sugerem que as partículas de membrana e os fatores bioativos secretados por MSC possuem efeito imunomodulador e, portanto, representam uma alternativa para a terapia livre de células que combina o potencial das MSC com a redução das dificuldades práticas que acompanham o uso de células vivas.pt_BR
dc.description.abstractIntroduction: Mesenchymal stromal cells (MSC) are a promising strategy for the treatment of inflammatory diseases. Although the MSC have shown therapeutic potential in tissue repair, controversy remains concerning to the short survival and the poor biodistribution of these cells in recipient tissues, due to the detainment of cells in the capillary network of the lungs after intravenous infusion. Objectives: To evaluate the therapeutic effects of bioactive factors secreted by MSC and to generate membrane particles from MSC with immunomodulatory properties, in order to increase the biodistribution of the therapeutic effect of MSC, avoiding cellular entrapment in pulmonary capillaries, as well as providing safer therapy based on MSC potential. Methods: Firstly, we established an organ explant culture of colon and investigated the effects of MSC stimulated with interferon-γ (IFN-γ) and their conditioned medium (CM) on mouse colon with DSS-induced colitis. The colonic explants were analyzed for histology, KI-67 expression and the culture supernatants were assayed for IL-6 production. Secondly, a new cell free therapy was developed based on the generation of small plasma membrane particles (MP) from MSC. MPs were generated from MSC and MSC stimulated with IFN-γ (MPγ). The MP enzymatic activity was evaluated and their immunomodulatory effects were tested on T cell and monocytes. Results: In the first study, MSC and CM treatments equally reduced the histological damages in the colonic explants; however, only CM treatment stimulated the cell proliferation in mucosa. In addition, the therapeutic effect of MSC and CM was mediated by the downregulation of pro-inflammatory cytokine IL-6. The second study demonstrated that the artificially generated MP not only exhibit ATPase, nucleotidase and esterase activity, indicating that they are enzymatically active, but also present immunomodulatory properties, since they selectively bound to plasmatic membrane of the monocytes and modulate their function by affecting gene expression and inducing apoptosis of pro-inflammatory monocytes. Conclusion: Taken together, our results suggest that the membrane particles and bioactive factors from MSC have an immunomodulatory effect and represent an alternative cell-free therapeutic that combines the potential of MSC with the reduction of the practical difficulties that come with the use of living cells.en
dc.format.mimetypeapplication/pdfpt_BR
dc.language.isoporpt_BR
dc.rightsOpen Accessen
dc.subjectCélulas mesenquimais estromaispt_BR
dc.subjectMesenchymal stem cellsen
dc.subjectMonocitospt_BR
dc.subjectMembrane particlesen
dc.subjectColitept_BR
dc.subjectBioactive factorsen
dc.subjectConditioned mediumen
dc.subjectMonocytesen
dc.subjectDSS-induced colitisen
dc.subjectColitisen
dc.subjectOrgan cultureen
dc.titlePartículas de membrana e fatores bioativos de células estromais mesenquimais : terapia livre de células para doenças inflamatóriaspt_BR
dc.typeTesept_BR
dc.identifier.nrb001051685pt_BR
dc.degree.grantorUniversidade Federal do Rio Grande do Sulpt_BR
dc.degree.departmentFaculdade de Medicinapt_BR
dc.degree.programPrograma de Pós-Graduação: Ciências em Gastroenterologia e Hepatologiapt_BR
dc.degree.localPorto Alegre, BR-RSpt_BR
dc.degree.date2017pt_BR
dc.degree.leveldoutoradopt_BR


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