Avaliação de um método simplificado de crescimento relativo por MALDI-TOF MS para determinação da suscetibilidade de Enterobacterales à polimixina B

Abstract

Base teórica: A resistência aos antimicrobianos (RAM) é um problema que vem crescendo e ameaçando a saúde pública em todo o mundo. Infecções por bactérias multirresistentes aos antimicrobianos resultam em aumento da duração do tratamento bem como nas taxas de morbi-mortalidade. A emergênia de bactérias Gram-negativas multirresistentes (MDR), em particular Enterobacterales resistentes a carbapenêmicos, levou a um aumento do uso de polimixinas na prática clínica.A administração rápida de antimicrobianos efetivos e a implementação de práticas suplementares de controle de infecção são necessárias para otimizar o tratamento e limitar a disseminação desses organismos altamente resistentes. O único método de referência para a determinação da suscetibilidade às polimixinas é a microdiluição em caldo (BMD). No entanto, a BMD é uma técnica demorada e trabalhosa. É necessário desenvolver novas metodologias que forneçam uma avaliação mais rápida da suscetibilidade às polimixinas, o que permitiria tratamentos mais eficazes. Objetivo: Propor um método simplificado de crescimento relativo por MALDI-TOF MS para determinação da suscetibilidadede Enterobacterales à polimixina B. Métodos:Estudo transversal e retrospectivo com 60 isolados bacterianos de Enterobacteralesresistentes ou suscetíveis a polimixina B obtidos nos anos de 2016 e 2017. A concentração Inibitória Mínima (CIM) da polimixina B foi determinada através do método de microdiluição em caldo. O método crescimento relativo foi adaptado da técnica MBT-ASTRA, a qual se baseia na avaliação quantitativa de proteínas de baixo peso molecular produzidas durante o crescimento bacteriano na presença e ausência do antibiótico (Polimixina B). Resultados: O método adaptado de crescimento relativo obteve uma concordância categórica de 96,7% quando comparado ao método referência de microdiluição em caldo. Conclusão:A técnica de crescimento relativo por MALDI-TOF MS foi capaz de discriminar entre isolados resistentes e suscetíveis àPolimixina B para bactérias da ordem Enterobacterales.

Background: Antimicrobial resistance (AMR) is a growing problemwhich threats public health around the world. Multidrug resistant bacteria infections result in an increase in the duration of treatment as well as morbidity and mortality rates.The emergence of multidrug resistant (MDR) gram-negative bacteria, in particular Enterobacterales resistant to carbapenems, has led to an increase use of polymyxins in clinical practice. Rapid administration of effective antimicrobials and implementation of supplemental infection control practices are necessary to improve patient outcomes and to limit the spread of these highly resistant organisms. The only reference method for the determination of susceptibility to polymyxinsis brothmicrodilution (BMD). However, BMD is a time consuming and laborious technique. It is necessary to develop new methodologies that provide faster evaluation of polymyxins susceptibility which would allow more effective treatments. Objective: To propose a simplified method of relative growth by MALDI-TOF MS for determination of Enterobacterales susceptibility to polymyxin B. Methods:A cross-sectional and retrospective study was conducted with sixty bacterial isolates resistant or susceptible to polymyxin B Enterobacterales obtained during 2016 and 2017.The Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of polymyxin B was determined by the broth microdilution method.The relative growth method was adapted from the MBT-ASTRA technique which is based on the quantitative evaluation of low molecular weight proteins produced during bacterial growth in the presence and absence of the antibiotic (Polymyxin B). Results:The adapted relative growth method obtained a categorical agreement of 96% when compared to the reference method. Conclusions: The relative growth technique by MALDI-TOF MS was able to discriminate between resistant and sensitive Polymyxin B isolates for Enterobacterales bacteria.