Influência do ferro no crescimento e na suscetibilidade ao itraconazol e deferasirox em Sporothrix spp

Abstract

Introdução: A esporotricose é uma micose subcutânea causada por fungos do gênero Sporothrix. O itraconazol é o antifúngico de escolha para esporotricose humana e animal, mas há relatos de resistência ou recorrência ao tratamento. Alguns patógenos necessitam de ferro para o seu desenvolvimento e o quelante de ferro deferasirox tem demonstrado atividade contra certos fungos patogênicos. Objetivo: O presente estudo avaliou o crescimento e a suscetibilidade ao estresse oxidativo de Sporothrix spp. in vitro quando exposto a diferentes concentrações de ferro e sua suscetibilidade ao itraconazol sozinho e em combinação com deferasirox. Materiais e métodos: Foram utilizados 10 isolados de cada espécie de S. schenckii e S. brasiliensis. A afinidade das cepas por ferro foi avaliada medindo o crescimento radial em placas de ágar batata dextrose contendo diferentes concentrações de ferro. As cepas também foram submetidas a 40 mM de peróxido de hidrogênio para avaliação da resposta ao estresse oxidativo. O crescimento dos isolados em meio com restrição ou sobrecarga de ferro também foi avaliado no caldo RPMI 1640 usando o ensaio colorimétrico com 2,3-Bis- (2-Metoxi-4-Nitro-5-Sulfofenil) -2H-Tetrazolium-5-Carboxanilida (XTT). A suscetibilidade dos isolados fúngicos frente ao itraconazol e ao deferasirox foi avaliada pela técnica de microdiluição in vitro. Resultados: A disponibilidade de ferro afetou o crescimento e a viabilidade de S. schenckii e S. brasiliensis ao estresse oxidativo. No entanto, a combinação de deferasirox com itraconazol in vitro resultou em indiferença para a maioria dos isolados de Sporothrix spp. Conclusão: Ferro é necessário para o desenvolvimento de Sporothrix spp., sendo S. brasiliensis mais sensível às diferentes concentrações de ferro que S. schenckii, embora o quelante de ferro deferasirox combinado com itraconazol não tenha sido sinérgico in vitro para esses isolados. Adição de ferro no meio de cultivo também aumentou a suscetibilidade de S. schenckii e S. brasiliensis ao estresse oxidativo. No entanto, mais estudos são necessários para analisar deferasirox como adjuvante terapêutico para Sporothrix spp.

Introduction: Sporotrichosis is a subcutaneous mycosis caused by fungi of the genus Sporothrix. Itraconazole is the drug of choice for human and animal sporotrichosis, but there are reports of resistance or recurrence to treatment. Some pathogens use iron for their development and the iron chelator deferasirox has demonstrated activity against some pathogenic fungi. Aim: The present study evaluated the in vitro growth and susceptibility to oxidative stress of Sporothrix spp. exposed to different iron levels and the susceptibility of Sporothrix spp. to itraconazole alone and in combination with deferasirox. Materials and methods: Ten isolates of each S. schenckii and S. brasiliensis species were used. The affinity of the strains for iron was evaluated by measuring the radial growth in potato dextrose agar plates containing different iron levels. Strains were further subjected to 40 mM hydrogen peroxide to evaluate oxidative stress response. Growth of the strains to iron-restricted or iron-overload medium was also assessed in RPMI 1640 broth using the 2,3-Bis- (2-Metoxi-4-Nitro-5-Sulfofenil) -2H-Tetrazolium-5-Carboxanilida (XTT) colorimetric assay. The susceptibility of fungal isolates to itraconazole and deferasirox was evaluated using in vitro microdilution technique. Results: Iron availability affected S. schenckii and S. brasiliensis growth and viability to oxidative stress. Nonetheless, the combination of deferasirox with itraconazole in vitro resulted in indifference for most Sporothrix spp. isolates. Conclusions: Iron is required for the development of Sporothrix spp. S. brasiliensis is more sensitive to different iron concentrations than S. schenckii, although iron chelator deferasirox combined with itraconazole was not synergistic in vitro for these strains. Iron addition in the culture medium also increased the susceptibility of S. schenckii and S. brasiliensis to oxidative stress. Further studies are required to analyze deferasirox as a therapeutic adjunct to Sporothrix spp.