O Uso de PCR na detecção de Escherichia coli enterotoxigênica em amostras de água de esgoto

Abstract

Riscos à saúde, associados à transmissão de doenças através do meio aquático, tornam importante a detecção de microrganismos patogênicos nesse ambiente. Portanto, o objetivo deste trabalho foi utilizar a técnica de PCR para uma detecção rápida de Escherichia coli enterotoxigênica (ETEC) em água de esgoto. Com o propósito de isolar esta bactéria, as amostras de esgoto foram inoculadas no meio seletivo ágar eosina azul de metileno (EMB). As colônias isoladas foram identificadas através de testes bioquímicos e as E. coli encontradas foram submetidas à extração de DNA plasmideal por lise alcalina e posteriormente à reação de PCR. Desses isolados, 5 apresentaram resultado positivo: 3 isolados foram positivos para o gene da toxina LT e 2 isolados para os genes de ambas as toxinas. As condições utilizadas na reação de PCR não detectaram a presença de E. coli, quando aplicada diretamente nas amostras de esgoto. Os produtos de amplificação dos 5 isolados de E. coli foram digeridos com enzimas de restrição e os fragmentos resultantes confirmaram a especificidade da amplificação. Os resultados sugerem que a técnica de PCR reduz o tempo de detecção do microrganismo, porém a amostra necessita de um pré-enriquecimento para aumentar a sensibilidade da técnica.

Health risks associated with waterborne transmission of diseases makes detection of pathogenic microorganisms critical in this environment. Therefore, the aim of this work was to use PCR assay for the rapid detection of enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) in sewage water. Therefore, with the purpose to isolate these bacteria, the samples of sewage water were inoculated in selective media eosin methylene blue agar (EMB). Biochemical testes were used to identify the isolated colonies and the E. coli found were submitted to extraction of the plasmid DNA by alkaline lise and used in the PCR reaction. Five isolates presented a positive result: three isolates were positive for LT toxin gene and two for both toxins (ST and LT). The amplification conditions used in PCR assay, when applied directly to sewage samples, did not detect the presence of the pathogenic E. coli. Amplification products of ETEC isolates were digested with restriction enzymes and the resulting fragments confirmed the specificity of the amplification. The results showed that PCR assay can reduce time detection however, the sample need an pre-enrichment cultivation in order to improve the sensibility of the technique, keeping the same amplification conditions.