Reação em cadeia pela polimerase no diagnóstico de pneumonia por pneumocystis carinii em portadores da sindrome de imunodeficiencia adquirida

Abstract

Amostras do lavado broncoalveolar de 78 pacientes intemados no Hospital de CHnicas de Porto Alegre com sindrome de imunodeficiencia adquirida, sintomas respirat6rios e submetidos a broncotibroscopia diagn6stica foram analisadas quanto a presen9a de Pneumlxystis carinii, utilizando-se a tecnica de rea9ao em cadcia pela polimerase (PCR) e os metodos de colorayao rotineiros de Leishman, Papanicolaou c prata de Grocott. A PCR foi realizada utilizando-se oligonucleotideos iniciadores pAZ 1 02-E: -5'- GAT GGC TGT TTC CAA GCC CA - 3'- e pAZ 102-H: 5'- GTC TAC GTT GCA AAG TAC TC- 3' -. Os produtos da amplificayao foram submetidos a elctroforese em gel de agarose, e banda especifica de Pneumocystis carinii (346 pares de bases) corada com brometo de etidio foi identificada com luz ultravioleta e fotografada . A PCR amplificou o DNA de Pneumocystis carinii em 17 amostras, enquanto os mctodos rotineiros mostraram resultados positivos em 13 dessas mesmas amostras e resultados negativos nas 65 restantes. A concordancia dos resultados entre a PCR c os metodos rotineiros foi de 94,9% (74/78 casos). A scnsihilidadc dos rnetodos rotineiros, considerando-se a PCR como padrao-aureo, foi de 76,5% ( 13/17 casos). A prevalencia de infec¥ao pulmonar por Pneumocystis carinii avaliada pela PCR nesta populayao, foi de 21,8% (17/78 casos). Nossos resultados bern como os dados da literatura sugcrem que a maior sensibilidade da PCR, em compara¥ao com as coloray5es convencionais, e real e que este novo metodo deve ser considerado como padrao-aureo para o diagn6stico da infec¥ao pulmonar por Pneumocystis carinii.

llronchoalveolar lavage samples from 78 patients admitted to the Hospital de Clinicas de Porto Alegre with acquired immunodeficiency syndrome, respiratory symptoms and submitted to diagnostic bronchoscopy were analysed in order to detect Pneumocystis carinii by polimerase chain reaction (PCR) and routine Leishman, Papanicolaou and Grocott's silver stains. PCR was perfonned with the oligonucleotide primers pAZ 1 02-E: -5'GA T GGC TGT TTC CAA GCC CA - 3' - e pAZ 1 02-H: 5' - GTC T AC GTT GCA AAG TAC TC - 3' -. The amplification products were subjected to eletrophoresis in agarose gels, and the l'neum()(ystis carinii specific band (346 base pairs) was tested by visualisation with ultraviolet light after ethidium bromide staining and photographed. Pneumocystis carinii DNA was amplified by PCR in 17 samples. Using the routine methods the microorganism was found in 13 samples from PCRpositive patients and not identified in all the remaining 65. The concordance between PCR and the routine methods were 94.9% (74/78 samples). The sensitivity of the routine methods considering PCR as the gold standard was 76.5% ( 13/17 samples). The prevalence of Pneumocyslis carinii lung infections analysed by PCR, in this population, was 21.8% (17/78 samples). Our results and the review of the literature suggest that the PCR's larger sensitivity, comparing with the conventional stains, is real and that this new method should be considered the gold standard to the diagnosis of Pneumocyslis carinii pneumonia.