Estudo comparativo do efeito da fotobiomodulação com laser intraoral e laser extraoral na mucosite bucal quimioinduzida em ratos

Abstract

A mucosite bucal (MB) é uma complicação frequente decorrente do tratamento antineoplásico estomatotóxico. As formas mais severas de mucosite estão associadas a ulcerações extensas, sintomatologia dolorosa, comprometimento nutricional, perda de peso, risco de infecções, redução da qualidade de vida, maior uso de recursos de saúde e até interrupção do tratamento oncológico. Consequentemente, esses fatores podem interferir de forma negativa no prognóstico do paciente. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito da fotobiomodulação (FBM) com laser intrabucal e laser extrabucal sobre as manifestações clínicas, histopatológicas e estado redox da mucosite bucal quimioinduzida por 5-Fluorouracil (5-FU) em ratos. Foram utilizados 96 ratos da linhagem Wistar divididos randomicamente em 6 grupos: Controle negativo (CN, sem intervenção, n=6), controle positivo (CP, indução de mucosite e nenhum tratamento, n=18), FBM intrabucal 6 J/cm2 (IB 6 J/cm2, indução de mucosite e aplicação de laser intrabucal 6 J/cm2, n=18), FBM extrabucal 6 J/cm2 (EB 6 J/cm2, indução de mucosite e aplicação de laser extrabucal 6 J/cm2, n=18), FBM extrabucal 12 J/cm2 (EB 12 J/cm2, indução de mucosite e aplicação de laser extrabucal 12 J/cm2, n=18) e FBM extrabucal 24J/cm2 (EB 24 J/cm2, indução de mucosite e aplicação de laser extrabucal 24 J/cm2, n=18). A mucosite foi induzida com a aplicação intraperitoneal de 5-FU nos dias 0 (60 mg/Kg) e 2 (40 mg/Kg) seguida pela escarificação da mucosa jugal bilateral com agulha estéril nos dias 3 e 4. Os animais receberam FBM diária bilateral de acordo com o seu grupo experimental e avaliação nos dias 0, 8, 10 e 14, sendo mortos 6 animais por grupo/dia de eutanásia. A avaliação clínica do grau de mucosite, de 0 a 3, foi realizada através de fotografia por pesquisador cegado e calibrado. Os cortes histológicos da área da lesão foram corados em HE para avaliação do reparo tecidual. Os parâmetros de estado redox foram avaliados através da mensuração fluorimétrica da oxidação de diclorofluorescina (DCFH) e da concentração de enzimas antioxidantes catalase (CAT) e glutationa peroxidase (GPx), além da glutationa (GSH). A análise clínica revelou que no dia 8, o grupo CP apresentou maiores escores de MB. Os grupos FBM apresentaram escores mais baixos de MB, no entanto, apenas o EB 6J/cm2 apresentou um grau significativamente menor em relação ao CP (p <0,05). Nos dias 10 e 14, todos os grupos de FBM apresentaram melhora na MB em relação ao CP (p <0,01). Histologicamente, no dia 8, o grupo CP apresentou lesões graves, com escores mais elevados (2,8 ± 0,4), diferindo significativamente de todos os grupos irradiados que obtiveram cicatrização acelerada (p <0,01). No dia 8 observamos que a indução de MB utilizando 5-FU (CP) mostrou um aumento do biomarcador de DCFH comparado ao CN (sem mucosite bucal) (p <0,001). Grupos tratados com FBM, em geral, exibiram nível reduzido deste biomarcador em comparação com o CP. No entanto, EB 6 J/cm2 e 12 J/cm2 apresentaram menor dano oxidativo que o CP indicado pelo menor DCFH (p <0,001, p <0,01, respectivamente). Além disso, esses grupos mostraram um nível similar desse biomarcador do que o CN (p> 0,05). Em conclusão, a irradiação com laser intra e extrabucal promoveu efeitos clínicos e histológicos positivos sobre a MB, sugerindo uma modulação do estado redox e de enzimas antioxidantes.

Oral mucositis (OM) is a frequent complication of stomatotoxic antineoplastic treatment. More severe forms of mucositis are associated with extensive ulcerations, painful symptoms, nutritional impairment, weight loss, risk of infections, reduced quality of life, higher use of health resources and even interruption of cancer treatment. Consequently, these factors may negatively interfere with the patient's prognosis. The purpose of this study was to evaluate the effect of photobiomodulation (PBM) with intraoral and extraoral laser on the clinical, histopathological and redox manifestations of 5-fluorouracil (5-FU) chemo-induced OM in rats. Wistar rats were randomly divided into 6 groups: negative control (NC, no intervention, n=6), positive control (PC, mucositis induction and no treatment, n=18), intraoral PBM 6 J/cm2 (IO 6 J/cm2, n=18), extraoral PBM 6 J/cm2 (EO 6 J/cm2, induction of mucositis and application of extraoral laser 6 J/cm2, n=18) , extraoral PBM 12 J/cm2 (EO 12 J/cm2, induction of mucositis and application of extraoral laser 12 J/cm2, n=18) and extraoral PBM 24 J/cm2 (EO 24J/cm2, induction of mucositis and extraoral laser application 24 J/cm2, n=18). OM was induced by intraperitoneal application of 5-FU on days 0 (60 mg/kg) and 2 (40 mg/kg) followed by scarification of the bilateral jugal mucosa with sterile needle on days 3 and 4. The animals received daily bilateral PBM according to their experimental group and were evaluated on days 0, 8, 10 and 14, and six animals per group / day of euthanasia were killed. The clinical evaluation of the degree of mucositis, from 0 to 3, was performed through photography by a blinded and calibrated researcher. Histological sections of the lesion area were stained in HE to evaluate of tissue repair. The redox state parameters were evaluated by fluorimetric measurement of DCFH oxidation and the concentration of antioxidant catalase (CAT) and glutathione peroxidase (GPx), as well as glutathione (GSH). Clinical analysis revealed that on day 8, the PC group presented higher OM scores. The PBM groups had lower OM scores, however, only the EO 6 J/cm2 presented a significantly lower degree of PC (p <0.05). On days 10 and 14, all PBM groups showed improvement in OM relative to PC (p <0.01). Histologically, on day 8, the PC group presented severe lesions, with higher scores (2.8 ± 0.4), differing significantly from all the irradiated groups that obtained accelerated healing (p <0.01). On day 8 we observed that the induction of OM using 5-FU (PC) showed an increase of the DCFH biomarker compared to NC (without OM) (p <0.001). PBM groups generally exhibited reduced levels of this biomarker compared to PC. However, EO 6 J/cm2 and 12 J/cm2 presented lower oxidative damage than the PC indicated by lower DCFH (p <0.001, p <0.01, respectively). In addition, these groups showed a similar level of this biomarker than the NC (p> 0.05). In conclusion, irradiation with intra and extraoral laser promoted positive clinical and histological effects on OM, suggesting a modulation of the redox state and antioxidant enzymes.