Células-tronco ovarianas e recuperação da fertilidade pós-quimioterapia em camundongos fêmeas

Abstract

Introdução: a alta prevalência do câncer e o aumento significativo da sobrevivência a longo prazo geraram interesse quanto à preservação da fertilidade em mulheres jovens expostas a quimioterapia e radioterapia. Nesse sentido, as células-tronco da linhagem das oogônias (oogonial stem cells - OSCs), abriram uma nova perspectiva de aplicação no tratamento e prevenção da infertilidade humana. Objetivos: neste trabalho isolamos as OSCs de camundongos para a terapia celular na recuperação da fertilidade pós-quimioterapia. Delineamento: Trata-se de um estudo experimental controlado. Método: Foram utilizadas como receptoras 18 camundongos fêmeas C57BL/6 adultas jovens. Como doadoras de OSCs foram utilizadas 8 camundongos C57BL/6 transgênicos para a proteína verde fluorescente (green fluorescent protein - GFP). O protocolo de indução de infertilidade consistiu em quinze injeções intraperitoneais de 2,5 mg/Kg de cisplatina com intervalo de 7 dias entre as três rodadas. O ciclo estral anterior e posterior a quimioterapia foi utilizado como controle da indução de infertilidade. Após três ciclos de quimioterapia, tendo sido confirmada a infertilidade, o grupo tratamento (9 fêmeas C57BL/6) recebeu 36 x 104 de uma suspensão celular contendo OSCs em solução fisiológica através de microinjeção intra-ovariana. O grupo controle (9 fêmeas C57BL/6) passou pela mesma intervenção cirúrgica e recebeu apenas solução fisiológica. Dez dias após a terapia celular, as fêmeas foram colocadas em contato com os machos para o acasalamento. Após 21 dias foi verificada a ocorrência de prole. Análises histológicas dos ovários e de imunohistoquimica foram realizadas para quantificar folículos viáveis e atrésicos. Na prole foi realizada imunohistoquimica para GFP na procura de células oriundas das OSCs transplantadas. Resultados: Avaliações histológicas demostraram que as OSCs foram capazes de aumentar o número de folículos primários, secundários e totais. Os animais tratados com OSCs alcançaram até duas gestações consecutivas. Em contraste, nenhuma fêmea no grupo de controle demonstrou função ovariana e nenhuma apresentou gestação. Os filhotes do grupo tratado apresentaram células positivas para GFP no tecido epitelial, muscular e nervoso, indicando a contribuição das OSCs GFP+ transplantadas para a formação da quimeras. Conclusão: A injeção intra-ovariana de OSCs em camundongos fêmeas com insuficiência ovariana induzida por cisplatina diminuiu o dano tecidual e foi capaz resgatar a fertilidade.

Background: Chemotherapy patients have adverse effects on the structure and function of the ovary leading to infertility. Recent studies have challenged the dogma that women are born with a finite number of oocytes without the capacity for renewal. Reports demonstrates formation of new oocytes from newly discovered germline stem cells, referred to as oogonial stem cells (OSCs). This study was conducted to further clarify the impact of a cell suspension enriched in OSCs on female reproductive function in an in vivo model of cisplatin-induced ovarian gonadotoxicity. Aims: To isolate OSCs from mice and apply for cell therapy in cisplatin-induced infertility mice model. Design: This is a controlled experimental study. Methods: Female mice received three cycles of 5 days 2.5 mg/kg cisplatin intraperitoneal applications followed by seven-days recovery. Infertile mice received GFP positive OSCs in loco into the ovary. Ten days after cell transplantation females were placed with males for 7 days in order to evaluate the possibility of progenies generation. Pups were evaluated for GFP expression and after F2 progeny generation females were killed and ovaries were processed for histology and follicle counting Results: Histological examinations shown OSCs were able to increase the number of primary, secondary and total follicles. OSCs treated animals achieved up to two consecutive pregnancies in contrast none of the animals in the control group demonstrated ovarian function and none achieved a pregnancy. Pups from the treated group presented GFP positive cells in epitelial, muscle, and nervous tissue indicating the contribution of transplanted GFP positive OSCs to the chimera formation. Conclusion: Intraovarian injection of OSCs into mice with cisplatin-induced ovarian failure diminished the histological damage and rescue fertility.