Influência do resveratrol, quercetina e temozolomida na formação de tumor-esferas em glioma humano in vitro

Abstract

Gliomas são tumores do Sistema Nervoso Central, originados de células gliais. Caracterizam-se por sua alta invasibilidade e proliferação, além de quimio e radiorresistência e altos índices de recorrência e morte. Evidências recentes sugerem que esses gliomas apresentam uma população de células tronco tumorais que estariam envolvidas na sua resistência a terapias. A linhagem celular de glioma humano U87 caracteriza-se por formar esferas quando em cultura e essas esferas são enriquecidas em células tronco tumorais. Temozolomida (Tmz) é um anti-tumoral utilizado na terapia de diversos tumores, inclusive gliomas. Resveratrol (Rsv) e Quercetina (Quer) são polifenóis encontrados em diversas plantas, como a uva, também estando presentes no vinho tinto. Esses polifenóis possuem diversos efeitos como: neuroproteção, anti-inflamatório, anti-oxidante, proteção cardíaca, entre outros. Nosso objetivo foi avaliar a influência da Tmz, do Rsv e da Quer na formação de esferas em cultura de células U87. Células foram cultivadas em condição padrão com 5% de SFB. Ensaio de formação de esferas foi realizado semeando 750 e 1000 células em uma placa de 96 poços, com diferentes tratamentos (Rsv 10 μM, Tmz 5 μM e Rsv 10 μM + Tmz 5 μM) ou então 750, 1125, 1700 e 2500 células foram semeadas e tratadas com Rsv 10 μM + Quer 25 μM. Citometria foi realizada utilizando anti-CD133. RNA de células tratadas com Rsv + Tmz e Rsv + Quer foi extraído e cDNA foi sintetizado, após foi realizado RT-PCR para o marcador de células indiferenciadas Oct4. O ensaio de β-galactosidase foi realizado após 7 dias de tratamento com Rsv + Quer. Resultados mostraram que a média do número de esferas formadas foi menor com Tmz (10) e Rsv + Tmz (12) comparado com o controle (18), para 1000 células plaqueadas e, somente com Rsv o número de esferas foi semelhante ao controle (26). Mas, o número de células CD133+ foi menor nos tratamentos (10,9 com Rsv; 5,8 com Tmz e 7,7% com Rvs + Tmz) do que no controle (12,1%). Para o tratamento com Rsv + Quer o número de esferas foi de 20, 32, 39 e 36 para 750, 1125, 1700 e 2500 células respectivamente, enquanto que para o controle os valores encontrados foram de 18, 32, 43 e 48. Além disso, através de RT-PCR foi possível ver que além de reduzir o número de células CD133, a combinação de Rsv e Tmz reduziu a expressão de Oct4, assim como Rsv + Quer. Também vimos um aumento da senescência nas células tratadas com Rsv + Quer quando comparadas com o controle. O efeito citotóxico da Tmz somente ocorre em concentrações acima de 100 μM e efeitos observados com concentrações tão baixas reforçam a importância do efeito específico sobre as células tronco do câncer. A procura de combinações de drogas que causem um efeito sinergístico nestas células pode representar uma boa estratégia terapêutica no combate às células tumorais.