Congelamento ultra-rápido de embriões Mus musculus com a utilização de sacarose e lactose

Abstract

Cento e seis mórulas de camundongos de cepa CF1 Suiça Albina, coletadas 76-78h após a administração de HCG, foram congeladas em solução de congelamento contendo glicerol 2,0M + sacarose 0,25M (Grupo S) ou Glicerol 2,0M + sacarose 0,25 (Grupo L), ambas em PBS modificado. Foi efetuado um pré-tratamento com Glicerol 2,0M durante 4 minutos, sendo as mórulas transferidas, posteriormanete, para a solução de congelamento, durante 1 minuto. O envase foi realizado em palhetas de 0,25ml em grupos de 5 a 11 mórulas. As palhetas contendo os embriões foram colocadas em vapor de N2 durante 2 minutos e, após, mergulhados em N2 líquido. O descongelamento foi efetuado em banhomaria a 37ºC por 20 segundos e foram recuperados 103 mórulas após a diluição do crioprotetor, que foi efetuada em solução de sacarose 0,5M (Grupo S) e lactose 0,5M (Grupo L), durante 5 , minutos, à temperatura ambiente. Após três banhos em PBS modificado, a 37ºC, por 44-48h. Através da avaliação morfológica, após descongelamento, 45 mórulas (86,5%) foram consideradas viáveis no grupo S e 46 (90,2%) no grupo L. O percentual de embriões que se desenvolveram após cultivo foi de 67,3% para o grupo S (n=52) e 64,7% para o grupo L (n=51). A análise estatística não revelou diferenças significativas (P >0,01) no número de embriões viáveis após descongelamento e índice de sobrevivência após cultivo, entre os dois açúcares testados.