Desenvolvimento e validação de métodos analíticos e estudos de estabilidade da rivaroxabana

Abstract

A análise de fármacos é fundamental nas diversas fases do desenvolvimento farmacêutico, tais como estudos de formulação, estabilidade e controle de qualidade do produto. A rivaroxabana (RIV) é um anticoagulante de uso oral indicado para prevenção da formação de coágulos venosos. A literatura pesquisada apresenta poucos relatos de determinação quantitativa e de estudos de estabilidade do fármaco em comprimidos. E ainda nenhum método analítico em compêndios oficiais Diante do exposto, o objetivo deste trabalho foi desenvolver e validar métodos analíticos para determinação qualitativa e quantitativa da RIV por cromatografia líquida de alta eficiência com detecção por UV e de ultra eficiência com detecção por espectrometria de massas (CLAE-UV e CLUE-EM) e eletroforese capilar (EC). Os resultados encontrados foram adequados conforme o preconizado nos guias oficiais nacionais e internacionais. Foi avaliada também a viabilidade da técnica de eletroforese capilar em microchip para análise de RIV. Através de método desenvolvido por CLAE foi realizado estudo de cinética de degradação e posterior avaliação do potencial tóxico in vitro das amostras de degradação forçada da RIV. A identificação de três produtos de degradação majoritários da RIV, formados a partir de estresse ácido, alcalino e fotolítico, foi realizada por CLUE-EM/EM, possibilitando a proposição da estrutura molecular de cada produto de degradação. O potencial tóxico da RIV antes e depois da exposição à degradação forçada foi avaliado através dos métodos in vitro MTT, Vermelho Neutro, Ensaio Cometa e DNA de baixo peso molecular. Não foram encontrados sinais de dano ao DNA celular, contudo, amostras de RIV expostas ao meio alcalino apresentaram maior redução da viabilidade celular. O trabalho avaliou ainda o perfil de dissolução da RIV em comprimidos baseado nos dados de absorção in vitro conforme modelagem in silico dos dados, estabelecendo uma correlação linear entre a fração absorvida e fração dissolvida. As diferentes metodologias e técnicas desenvolvidas e aplicadas nesse trabalho contribuem para o desenvolvimento do controle de qualidade farmacêutico na direção de ensaios mais confiáveis que garantam a segurança e eficácia de medicamentos.

Drug analysis is critical at various stages of pharmaceutical development, such as formulation studies, stability and quality control products. Rivaroxaban (RIV) is an oral anticoagulant indicated for prevention of thromboembolism. Literature contains few reports of quantitative determination and drug stability studies of RIV on pharmaceutical formulation. Analytical method for RIV quality control are not evaluable on official guides yet. This research work aimed to develop and validate analytical methods for qualitative and quantitative determination of RIV by high and ultra performance liquid chromatography with UV detection mass spectrometry detection (HPLC -UV and UPLC-MS) and capillary electrophoresis (CE). The results were adequate as recommended in national and international official guides. Reliability of RIV analysis by microchip capillary electrophoresis was also assessed. Through the method developed by HPLC degradation kinetic studies were performed, zero order kinetic has better description of RIV degradation behaviour. RIV toxic potential before and after exposure to forced degradation was assessed by in vitro methods of MTT, Neutral Red, Comet Assay, and Low Molecular Weight DNA. There were no signals of DNA damage however, RIV samples exposed to alkaline medium showed increased reduction in cell viability. Identification of RIV degradation products formed after exposure to acid and alkaline media and UVC radiation was performed by UPLC-MS / MS. It was possible to elucidate molecular structures of three major degradation products. This study also assessed the dissolution profile of RIV tablets based on in vitro absorption data, a linear point-to-point correlation was found for fraction absorbed and dissolved. Different methodologies and techniques developed and applied in this work can contribute to the development of pharmaceutical quality towards more reliable tests to ensure safety and efficacy of medicines.