Silenciamento do receptor do peptídeo liberador de gastrina (GRPR) induz senescência em glioblastoma multiforme A172

Abstract

Glioblastoma multiforme grau IV é a manifestação mais agressiva dos gliomas, sendo caracterizado pela proliferação excessiva, resistência a apoptose e invasibilidade. Em função da resistência aos tratamentos disponíveis, o prognóstico desse pacientes é bastante ruim. O peptídeo liberador de gastrina (gastrin-releasing peptide, GRP) e seu receptor (GRPR) contribuem para a malignidade de diversos tumores, incluindo gliomas, por ativar vias de proliferação, possivelmente atuando junto a outros receptores responsivos a sinais de proliferação como EGFR (epidermal growth factor receptor). Com isso, nós buscamos estudar o efeito do silenciamento de GRPR em linhagem celular de glioblastoma A172, em especial o efeito na proliferação celular. O knockdown estável de GRPR foi realizado através de vetor lentiviral contendo uma sequência de interferência short hairpin RNAi. O silenciamento gerou alterações morfológicas, como aumento do tamanho celular, alterações no ciclo celular, além de diminuir a taxa de proliferação das células silenciadas. No entanto, o efeito mais proeminente do silenciamento de GRPR parece ser o potencial de indução de senescência nas células A172, como evidenciado na análise de morfologia nuclear (NMA) e no ensaio de SA-β-galactosidase.

Glioblastoma multiforme, grade IV glioma, is the most aggressive type of glioma, characterized by excessive cell proliferation, resistance to apoptosis and invasibility. Due to resistance to currently available treatment options, the prognosis for these patients is very dismal. Gastrin releasing peptide (GRP) and its receptor (GRPR) contribute to the malignancy of many tumor types, including gliomas, because of their ability to activate proliferation pathways, possibly interacting with other receptors responsive to proliferation signals such as EGFR (epidermal growth factor receptor). With that, we intended to study the effect of GRPR silencing on glioblastoma cell line A172, specially its effect on cell proliferation. Stable GRPR knockdown was achieved by a lentiviral vector using a short hairpin interfering RNA sequence. Silencing caused morphological alterations, such as increase in cell size, cell cycle alterations, in addition to decreasing the silenced cells proliferation rate. However, the most prominent effect of GRPR silencing seems to be the potential do induce senescence on A172 cells, as confirmed by Nuclear Morphometric Analysis (NMA) and the SA-β-galactosidase assay.